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yakir

银虫 (小有名气)

[求助] ProteinL 纯化mouse IgG1,PH2.0洗脱下来很少,有什么方法提高?

杂交瘤表达的mouse IgG1 ,kappa轻链的,因为里面有血清,所以选用Protein L,结合良好,但洗脱的时候发现洗脱不理想,用了100mM Glycine,150mMNaCl,PH3.5,PH3.0,PH2.5,PH2.0分别洗脱,就PH2.0能洗脱下来小部分。还有什么其他的方法能提高吗?
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yakir

银虫 (小有名气)

自己顶下。
昨天尝试了分别在PH2.0洗脱液中加入了0.5M NaCl,1M NaCl,2M NaCl,还是没有帮助。
尝试了ProteinG,同样的问题PH2.0只能洗脱下来少量,同时也尝试了PH2.0洗脱液中加入了0.5M NaCl,1M NaCl,2M NaCl,没有帮助哦。
看来只能尝试在培养上清中加入0.5-3M NaCl ,然后用ProteinA来试试看了,先捕获了再考虑去除牛的IgG吧,下周再尝试,期待结果。
一步一步!
2楼2015-01-16 10:37:12
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lijing1212

禁虫 (初入文坛)

本帖内容被屏蔽

3楼2015-01-20 14:45:48
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yakir

银虫 (小有名气)

经过试验得到结果:培养上清加入0.5M NaCl能够结合proteinA ,PH3.0能够洗脱下来。然后PH7.0的buffer过Q HP,牛IgG在流出液中,mouse IgG用300mM NaCl洗脱能够等到。
一步一步!
4楼2015-01-30 17:07:37
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yakir

银虫 (小有名气)

只是用了两步,稍微麻烦点。。。
一步一步!
5楼2015-01-30 17:08:23
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