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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 层析/纯化 » ProteinL 纯化mouse IgG1，PH2.0洗脱下来很少，有什么方法提高？
汕头大学海洋科学接受调剂
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yakir

银虫 (小有名气)

[求助] ProteinL 纯化mouse IgG1，PH2.0洗脱下来很少，有什么方法提高？

杂交瘤表达的mouse IgG1 ，kappa轻链的，因为里面有血清，所以选用Protein L，结合良好，但洗脱的时候发现洗脱不理想，用了100mM Glycine，150mMNaCl，PH3.5，PH3.0，PH2.5，PH2.0分别洗脱，就PH2.0能洗脱下来小部分。还有什么其他的方法能提高吗？
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一步一步！
1楼 2015-01-15 10:10:46
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yakir

银虫 (小有名气)
经过试验得到结果：培养上清加入0.5M NaCl能够结合proteinA ，PH3.0能够洗脱下来。然后PH7.0的buffer过Q HP，牛IgG在流出液中，mouse IgG用300mM NaCl洗脱能够等到。
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4楼2015-01-30 17:07:37
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yakir

银虫 (小有名气)
自己顶下。
昨天尝试了分别在PH2.0洗脱液中加入了0.5M NaCl，1M NaCl，2M NaCl，还是没有帮助。
尝试了ProteinG，同样的问题PH2.0只能洗脱下来少量，同时也尝试了PH2.0洗脱液中加入了0.5M NaCl，1M NaCl，2M NaCl，没有帮助哦。
看来只能尝试在培养上清中加入0.5-3M NaCl ，然后用ProteinA来试试看了，先捕获了再考虑去除牛的IgG吧，下周再尝试，期待结果。
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2楼2015-01-16 10:37:12
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yakir

银虫 (小有名气)
只是用了两步，稍微麻烦点。。。
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5楼2015-01-30 17:08:23
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