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yakir

银虫 (小有名气)

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专业: 蛋白质组学

[求助] ProteinL 纯化mouse IgG1，PH2.0洗脱下来很少，有什么方法提高？

杂交瘤表达的mouse IgG1 ，kappa轻链的，因为里面有血清，所以选用Protein L，结合良好，但洗脱的时候发现洗脱不理想，用了100mM Glycine，150mMNaCl，PH3.5，PH3.0，PH2.5，PH2.0分别洗脱，就PH2.0能洗脱下来小部分。还有什么其他的方法能提高吗？

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一步一步！

1楼 2015-01-15 10:10:46

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yakir

银虫 (小有名气)

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自己顶下。
昨天尝试了分别在PH2.0洗脱液中加入了0.5M NaCl，1M NaCl，2M NaCl，还是没有帮助。
尝试了ProteinG，同样的问题PH2.0只能洗脱下来少量，同时也尝试了PH2.0洗脱液中加入了0.5M NaCl，1M NaCl，2M NaCl，没有帮助哦。
看来只能尝试在培养上清中加入0.5-3M NaCl ，然后用ProteinA来试试看了，先捕获了再考虑去除牛的IgG吧，下周再尝试，期待结果。