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[交流] 植物组织培养细节很重要已有4人参与

　　植物组织培养是高中生物新课标实验中的重要实验，通过组培，能提高学生实践动手能力、科学实验能力、技术推广能力等，也是学生最想动手操作的一个实验。但许多老师和同学组组培操作过程中因为一些细节问题的疏忽，最终导致实验未能成功。下面为大家总结组培过程中的注意事项。

　　1. 培养基的配制

　　植物组织培养最常用的培养基为MS培养基，其中包含几十种化合物，在配制培养基时切忌“一锅煮”，就是不能将各种化合物一齐添加进去，因为有些化合物相遇会发生化学反应产生沉淀，影响培养基的营养成分，因此，一定要等到一种成分溶解之后，再缓慢的添加另一种成分，使其成为均一、无沉淀的培养基。

　　另外，培养基的pH值会对培养基的硬度造成影响。若将培养基的pH调的过高，则会使培养基变硬，进而增加了接种的阻力，从而对外植体造成损伤。若将培养基的pH值调的过低，则会使培养基不能凝固，起不到固定外植体的作用。因此，将培养基的pH调节至6.0即可。

　　2. 外植体的选择

　　为了使接种后的诱导得以成功，选择的外植体应该是幼嫩的、处于生长旺盛时期的。而且选择的外植体的体积不能过小，如若过小则会影响愈伤组织的形成，从而影响进一步的分化。因此，一般接种的外植体体积在0.5~1.0cm2的范围内即可。

　　3. 消毒

　　外植体的消毒主要分为两个阶段。首先是初次消毒，先用流水冲洗，然后用洗衣粉水进行刷洗，以去除表面的污垢，最后用流水冲洗20min，完成第一次的消毒。接下来的消毒步骤要在超净工作台中进行，在各种消毒剂中升汞的杀菌效果最好，但由于其中含有重金属，且实验后的收集工作不易，因此在中学实验中不推荐使用升汞。采用酒精消毒30s，2%~10%的次氯酸钠消毒8~10min即可达到同样的消毒效果。

　　4. 接种

　　首先，点燃酒精灯，用酒精棉球擦拭双手，再擦拭实验用到的器械，然后在火焰上反复灼烧，放置一旁待到器械温度不高时方可用其进行操作，以免将外植体烫伤。操作过程中，避免双手在培养皿上方来回通过造成外植体的污染，可以在每次修剪完外植体后将培养皿的盖子盖上，以降低污染率。接种前，要将培养基的瓶盖在火焰上迅速灼烧(由于目前大部分学校都在使用塑料组培瓶，因此一定要迅速通过火焰，以防损坏组培瓶)，方可进行接种。

　　5. 培养

　　接种好的培养瓶放置于光照培养架上，每天给予10h的光照即可满足外植体分化对光照的需求。

　　6. 炼苗与移栽

　　待到无菌苗长至组培瓶的瓶口时即可进行移栽，如若不移栽，则会影响植株的进一步生长，最终导致植株的死亡。移栽之前，首先要对组培苗进行炼苗，具体做法为先闭瓶锻炼3d，再开瓶锻炼3d，以培养基上开始长菌为移栽的标准。

　　移栽前，一定要将根部的培养基洗净，如若没有洗净，在种植于土壤中时，培养基的营养成分会加剧土壤微生物的生长，降低组培苗的移栽成活率。为了提高组培苗的成活率，可先在灭过菌的珍珠岩或蛭石上培养使根系发达再转移到土壤中。

　　植物组织培养并不像您想象中的那么困难，只要在整个操作过程中注意到每个细节，一定会收获到成功的喜悦!

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