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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 植物组织培养方面的实验操作经验总结
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森林7631

铜虫 (小有名气)

[求助] 植物组织培养方面的实验操作经验总结

各位亲们好，刚开始接触植物组织培养这方面的实验，实验操作中许多需要注意的事项还不是很清楚，希望能够得到大家的帮助，减少实验污染。
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Time lost can not be recalled.
1楼2012-05-09 17:36:21
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回帖置顶 ( 共有1个 )

xiaoxiong520

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+3, MolEPI+1, 谢谢分享经验 2012-05-10 11:29:21
森林7631: 金币+2, ★★★★★最佳答案 2012-05-10 14:16:31
初代培养：
1、外植体的选择及消毒：
      幼年组织比老年组织具有较高的行态发生能力。外植体的大小茎段长0.5cm，叶片面积5mm2。 把材料切割成适当大小，即灭菌容器能放入为宜。在超净台用70％酒精消毒10-30s；用杀菌剂0.1%升汞处理5-20 min；
用无菌水涮洗几次，每次不少于3min，以尽量去除残毒。
2、无菌操作
    ⑴ 超净工作台灭菌  开始无菌操作前半小时，打开超净工作台上的紫外灯，照射20分钟后，关闭紫外灯，使超净工作台正常送风，10分钟左右后，即可开始无菌操作。
    ⑵ 双手及接种器械灭菌  进行无菌操作前，先用肥皂洗涤双手，穿好工作服。用70％～75％的酒精擦拭台面并消毒双手。所有接种器械用75％酒精浸泡，在酒精灯上灼烧灭菌。
    ⑶ 接种  切去材料两端各0.5cm左右长度茎段，将茎段接种到初代培养基上。在培养容器上标明培养基代号和接种日期。
3、污染的原因及对策　　　　　　　　　　　　
     污染：组培过程中培养基和培养材料滋生杂菌导致培养失败现象。   （1）污染的原因 外植体带菌，培养基灭菌不彻底，操作员不遵守操作规程等。细菌污染  在接种后1-2天可发现，菌斑呈粘液状。
真菌污染  在接种3天后可发现，污染部分长有不同颜色的霉菌。
    （2）污染的预防措施
将取的枝条用水冲干净后插入自来水中使其抽枝，用新抽的枝作外植体。
晴天中午到下午采样；
操作人员严格遵守操作规程接种；
培养基及其用具灭菌要彻底。
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森林7631
5楼2012-05-10 09:53:16
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starseacow

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西瓜: 金币+2, 鼓励交流 2012-05-09 19:05:38
森林7631: 金币+3, ★★★很有帮助 2012-05-10 08:03:56
培养基，器皿灭菌，超净台使用前最好紫外照至少半个小时，操作前把手洗净并用70%乙醇涂抹杀菌，操作时在酒精灯灯焰附近，但要注意不要烫伤植物材料。刚开始做染菌总是不可避免的，操作几次熟练了就没问题了
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植物生理群69993869，为避免广告，申请加入请提供木虫昵称，院校及专业信息
2楼2012-05-09 17:42:49
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森林7631

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by starseacow at 2012-05-09 17:42:49:
培养基，器皿灭菌，超净台使用前最好紫外照至少半个小时，操作前把手洗净并用70%乙醇涂抹杀菌，操作时在酒精灯灯焰附近，但要注意不要烫伤植物材料。刚开始做染菌总是不可避免的，操作几次熟练了就没问题了

3楼2012-05-10 08:04:03
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dfl204

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
不管什么时候，开后的皿、瓶上方和前面最好不要有东西，需要注意的是手和胳膊也不要不小心放到它们上方。
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森林7631
4楼2012-05-10 09:42:15
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森林7631

铜虫 (小有名气)
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引用回帖:
5楼: Originally posted by xiaoxiong520 at 2012-05-10 09:53:16:
初代培养：
1、外植体的选择及消毒：
      幼年组织比老年组织具有较高的行态发生能力。外植体的大小茎段长0.5cm，叶片面积5mm2。 把材料切割成适当大小，即灭菌容器能放入为宜。在超净台用70％酒精消毒10-30s ...

6楼2012-05-10 14:16:47
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森林7631

铜虫 (小有名气)
送鲜花一朵
引用回帖:
4楼: Originally posted by dfl204 at 2012-05-10 09:42:15:
不管什么时候，开后的皿、瓶上方和前面最好不要有东西，需要注意的是手和胳膊也不要不小心放到它们上方。

7楼2012-05-10 14:19:07
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robocop

木虫 (著名写手)
找实验室师兄师姐学学啊
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纵然我扑倒在地，一颗心依然举着你.晨曦中你拔地而起，我就在你的形象里。
8楼2012-06-05 21:10:37
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