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xiaoxiong520

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+3, MolEPI+1, 谢谢分享经验 2012-05-10 11:29:21
森林7631: 金币+2, ★★★★★最佳答案 2012-05-10 14:16:31
初代培养:
1、外植体的选择及消毒:
      幼年组织比老年组织具有较高的行态发生能力。外植体的大小茎段长0.5cm,叶片面积5mm2。 把材料切割成适当大小,即灭菌容器能放入为宜。在超净台用70%酒精消毒10-30s;用杀菌剂0.1%升汞处理5-20 min;
用无菌水涮洗几次,每次不少于3min,以尽量去除残毒。
2、无菌操作
    ⑴ 超净工作台灭菌  开始无菌操作前半小时,打开超净工作台上的紫外灯,照射20分钟后,关闭紫外灯,使超净工作台正常送风,10分钟左右后,即可开始无菌操作。
    ⑵ 双手及接种器械灭菌  进行无菌操作前,先用肥皂洗涤双手,穿好工作服。用70%~75%的酒精擦拭台面并消毒双手。所有接种器械用75%酒精浸泡,在酒精灯上灼烧灭菌。
    ⑶ 接种  切去材料两端各0.5cm左右长度茎段,将茎段接种到初代培养基上。在培养容器上标明培养基代号和接种日期。
3、污染的原因及对策            
     污染:组培过程中培养基和培养材料滋生杂菌导致培养失败现象。   (1)污染的原因 外植体带菌,培养基灭菌不彻底,操作员不遵守操作规程等。细菌污染  在接种后1-2天可发现,菌斑呈粘液状。
真菌污染  在接种3天后可发现,污染部分长有不同颜色的霉菌。
    (2)污染的预防措施
将取的枝条用水冲干净后插入自来水中使其抽枝,用新抽的枝作外植体。
晴天中午到下午采样;
操作人员严格遵守操作规程接种;
培养基及其用具灭菌要彻底。

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5楼2012-05-10 09:53:16
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