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植物组织培养方面的实验操作经验总结
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| 各位亲们好，刚开始接触植物组织培养这方面的实验，实验操作中许多需要注意的事项还不是很清楚，希望能够得到大家的帮助，减少实验污染。 |
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 【分子生物】EPI帖 | 组培 |
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初代培养： 1、外植体的选择及消毒： 幼年组织比老年组织具有较高的行态发生能力。外植体的大小茎段长0.5cm，叶片面积5mm2。 把材料切割成适当大小，即灭菌容器能放入为宜。在超净台用70％酒精消毒10-30s；用杀菌剂0.1%升汞处理5-20 min； 用无菌水涮洗几次，每次不少于3min，以尽量去除残毒。 2、无菌操作 ⑴ 超净工作台灭菌 开始无菌操作前半小时，打开超净工作台上的紫外灯，照射20分钟后，关闭紫外灯，使超净工作台正常送风，10分钟左右后，即可开始无菌操作。 ⑵ 双手及接种器械灭菌 进行无菌操作前，先用肥皂洗涤双手，穿好工作服。用70％～75％的酒精擦拭台面并消毒双手。所有接种器械用75％酒精浸泡，在酒精灯上灼烧灭菌。 ⑶ 接种 切去材料两端各0.5cm左右长度茎段，将茎段接种到初代培养基上。在培养容器上标明培养基代号和接种日期。 3、污染的原因及对策 污染：组培过程中培养基和培养材料滋生杂菌导致培养失败现象。 （1）污染的原因 外植体带菌，培养基灭菌不彻底，操作员不遵守操作规程等。细菌污染 在接种后1-2天可发现，菌斑呈粘液状。 真菌污染 在接种3天后可发现，污染部分长有不同颜色的霉菌。 （2）污染的预防措施 将取的枝条用水冲干净后插入自来水中使其抽枝，用新抽的枝作外植体。 晴天中午到下午采样； 操作人员严格遵守操作规程接种； 培养基及其用具灭菌要彻底。 |
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