24小时热门版块排行榜    

查看: 7411  |  回复: 32

moshangchenx

金虫 (正式写手)

引用回帖:
17楼: Originally posted by yangzhx at 2015-01-13 16:49:34
可能是跑胶染料的问题,不知你用的什么染料。染料能和DNA结合,影响连接效率。建议更换染料或者减少加入的量。

我用的是EB
科研无止境,我心成蹉跎
21楼2015-01-14 19:22:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

SilenceYF

金虫 (正式写手)

头像不错

[ 发自小木虫客户端 ]
我热爱我的热爱~~
22楼2015-01-14 19:32:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

547star

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
moshangchenx(西门吹雪170代发): 金币+3, 鼓励回帖交流 2015-01-15 20:00:50
重新制备载体和克隆片段,试试分别酶切,先切低盐缓冲液的酶,做下乙醇沉淀,再在与第一次等体积或加倍体积的体系切另一个酶,不要一下切2种酶。胶回收不要在紫外下照太久,胶回收等试剂盒最后洗脱下来的时候,如果用水,pH要在8.0这样,如果不好把握,建议用1/10-1/2浓度的TE(pH=8.0)。感受态细胞的转化效率有没有10^6以上?质粒转出来要很多才大道高的转化效率,一般多估计还不一定达到。T4 DNA连接酶反应体系中可以加一点ATP,有助于提高连接效率,酶的使用量按照平端的来添加,建议使用含高浓度T4 DNA连接酶的快速连接酶。
为什么
23楼2015-01-14 23:43:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jijianhuij

木虫 (小有名气)

感谢参与,应助指数 +1
豆哥: 应助指数-1, 不是应助 2016-02-21 21:28:49
技术贴去丁香园啊.其实做实验有问题才是好事

[ 发自小木虫客户端 ]
24楼2015-01-15 00:17:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zergbloody

铁虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
moshangchenx(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-01-15 20:01:01
使用solution I,然后你把载体和片段都做几个稀释的梯度,16度连试试,几个小时就ok。并不是回收后越浓越好。我试过稀释到几纳克的载体,可以连接上的,浓度大反而抑制连接效率。祝好!

[ 发自小木虫客户端 ]
25楼2015-01-15 08:46:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

科科2013

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
7楼: Originally posted by moshangchenx at 2015-01-12 10:13:07
我们老师很固执,他认为能做出来,是我能力不行,这两个位点是他设计的,可能是嫌我说他位点弄得不好吧,现在一说换位点,他就很生气,唉...

偷偷换吧,要不让他试试?
26楼2015-01-15 11:10:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Love_8023

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

就是胶回收试剂盒,一般胶回收试剂盒都能用于纯化DNA产物

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
27楼2015-01-15 13:42:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Love_8023

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

就是胶回收试剂盒,一般都能用于DNA产物的纯化

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
28楼2015-01-15 13:44:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Love_8023

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
20楼: Originally posted by moshangchenx at 2015-01-14 19:22:46
您好,请问直接过柱是用的什么柱子,有专门的试剂盒还是用胶回收试剂盒或者是提取基因组DNA的试剂盒里的柱子?...

就是胶回收试剂盒

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
29楼2015-01-15 13:45:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sarah_lz

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
moshangchenx: 金币+2, 有帮助 2015-01-15 16:19:45
建议用于连接的片段跑胶看一下大致浓度,以防你拿着不含片段的东西在做
其次你的载体过大,片段插入浓度需要控制比较低。
克服载体过大的另一个方法就是先换小一点的载体,连接测序成功后,得到纯度较高的目标片段,再与目标载体连接
另外 连上后太大了,超过10k了,转化也有困难,需要条件优化
祝好运
30楼2015-01-15 15:28:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 moshangchenx 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 268求调剂 +8 一定有学上- 2026-03-14 9/450 2026-03-17 17:47 by laoshidan
[考研] 326求调剂 +5 上岸的小葡 2026-03-15 6/300 2026-03-17 17:26 by ruiyingmiao
[考研] 材料专硕274一志愿陕西师范大学求调剂 +5 薛云鹏 2026-03-13 5/250 2026-03-17 10:15 by Sammy2
[考研] [导师推荐]西南科技大学国防/材料导师推荐 +3 尖角小荷 2026-03-16 6/300 2026-03-16 23:21 by 尖角小荷
[基金申请] 国自科面上基金字体 +6 iwuli 2026-03-12 7/350 2026-03-16 21:18 by sculhf
[考研] 一志愿211 0703方向310分求调剂 +3 努力奋斗112 2026-03-15 3/150 2026-03-16 16:44 by houyaoxu
[考研] 085600调剂 +5 漾漾123sun 2026-03-12 6/300 2026-03-16 15:58 by 漾漾123sun
[考研] 0703化学调剂,求各位老师收留 +8 秋有木北 2026-03-14 8/400 2026-03-16 15:21 by 哦哦123
[考研] 288求调剂 +4 奇点0314 2026-03-14 4/200 2026-03-14 23:04 by JourneyLucky
[考研] 中科大材料专硕319求调剂 +3 孟鑫材料 2026-03-13 3/150 2026-03-14 18:10 by houyaoxu
[考研] 328求调剂 +3 5201314Lsy! 2026-03-13 6/300 2026-03-14 15:31 by hyswxzs
[考研] 331求调剂(0703有机化学 +5 ZY-05 2026-03-13 6/300 2026-03-14 10:51 by Jy?
[考研] 308 085701 四六级已过求调剂 +7 温乔乔乔乔 2026-03-12 14/700 2026-03-14 10:49 by JourneyLucky
[考研] 330求调剂 +3 ?酱给调剂跪了 2026-03-13 3/150 2026-03-14 10:13 by JourneyLucky
[考研] 【考研调剂求收留】 +3 Ceciilia 2026-03-11 3/150 2026-03-13 20:18 by JourneyLucky
[考研] 求调剂 +5 一定有学上- 2026-03-12 5/250 2026-03-13 18:31 by ms629
[考研] 求调剂 +3 程雨杭 2026-03-12 3/150 2026-03-13 15:06 by JourneyLucky
[考研] 求调剂 资源与环境 285 +3 未名考生 2026-03-10 3/150 2026-03-13 10:31 by houyaoxu
[考研] 321求调剂(食品/专硕) +3 xc321 2026-03-12 6/300 2026-03-13 08:45 by xc321
[考研] 大连大学化学专业研究生调剂 +3 琪久. 2026-03-10 8/400 2026-03-11 10:02 by 琪久.
信息提示
请填处理意见