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金虫 (小有名气)

你的问题解决了么我最近也在用这个载体pDBLEU，和你一样，克隆了一段时间，至今还没成功，遇到和你相似的问题，只是酶有一个不同，我用的是spe I 和sal I，很少遇到这样的问题

31楼2016-02-20 09:09:38

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新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

载体太大了，好像化学感受态接受连接产物的上限就是一万bp。去别的实验室借电转仪转化吧。
好的T4连接酶不需要16度过夜（哪怕说明书这么写），25度一小时就够了。如果片段浓度高，连接时间又长，可能多个片段相连接，产生大产物，无法转化。

32楼2016-02-20 15:39:39

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新虫 (小有名气)

引用回帖:

2楼: Originally posted by moshangchenx at 2015-01-12 09:08:50
胶回收的时候先用AXYGEN的回收试剂盒，但效果不大好，之后采用冷冻离心经酚-氯仿抽提进行胶回收的

载体太大了
说明书上有没有写超过多少bp（好像是8000）要加异丙醇？滤膜是网状的，一个很大的东西缠绕在上面，当然很难洗脱

33楼2016-02-20 15:43:55

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