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genewind

金虫 (小有名气)

你的问题解决了么 我最近也在用这个载体pDBLEU,和你一样,克隆了一段时间,至今还没成功,遇到和你相似的问题,只是酶有一个不同,我用的是spe I 和sal I,很少遇到这样的问题
31楼2016-02-20 09:09:38
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diaomou

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

载体太大了,好像化学感受态接受连接产物的上限就是一万bp。去别的实验室借电转仪转化吧。
好的T4连接酶不需要16度过夜(哪怕说明书这么写),25度一小时就够了。如果片段浓度高,连接时间又长,可能多个片段相连接,产生大产物,无法转化。
32楼2016-02-20 15:39:39
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diaomou

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
2楼: Originally posted by moshangchenx at 2015-01-12 09:08:50
胶回收的时候先用AXYGEN的回收试剂盒,但效果不大好,之后采用冷冻离心经酚-氯仿抽提进行胶回收的

载体太大了
说明书上有没有写超过多少bp(好像是8000)要加异丙醇?滤膜是网状的,一个很大的东西缠绕在上面,当然很难洗脱
33楼2016-02-20 15:43:55
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