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正在扩增李斯特菌的hly基因，但是换了三对引物都扩不出来~已有2人参与
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| 买了单核细胞增生李斯特菌19115的菌株，干粉溶解后培养提取DNA，浓度20ng/ul或50ng/ul,针对该菌保守基因hly设计引物，产物大小1600、2000、600bp，但是怎么跑都无带产生，引物可以看到二聚体。。是菌的问题，提取的问题，还是PCR问题，或者引物问题？ |
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2楼2015-01-11 21:43:01
18761615793
木虫 (正式写手)
小虫
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【答案】应助回帖
感谢参与，应助指数 +1
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可能的原因有 ① 模板提取时候出现问题，PCR扩增的时候模板已经降解，无模板进行扩增，所以跑不出条带 ② 引物设计不合理，无法与模板结合进行延伸（但是这种可能性较小） ③ 反应体系的问题，就是酶的问题，不知道你用的是什么酶，酶的特异性太差，没有指导正确模板的扩增，反而产生了引物二聚体，如果是这样，换酶就行了 总的来说，着重考虑两方面原因：酶和模板，希望对你有所帮助 http://www.detaibio.com/relia-hotstart-polymerase.html |
3楼2015-01-12 09:10:45