| 查看: 1131 | 回复: 2 | ||
[求助]
正在扩增李斯特菌的hly基因，但是换了三对引物都扩不出来~ 已有2人参与
|
| 买了单核细胞增生李斯特菌19115的菌株，干粉溶解后培养提取DNA，浓度20ng/ul或50ng/ul,针对该菌保守基因hly设计引物，产物大小1600、2000、600bp，但是怎么跑都无带产生，引物可以看到二聚体。。是菌的问题，提取的问题，还是PCR问题，或者引物问题？ |
回复此楼» 猜你喜欢
氢氧化钾活化操作
已经有19人回复
-
散金
已经有68人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有169人回复
-
生物质超级电容器
已经有0人回复
-
ALK5 高选择性小分子 LY-3200882：可放大合成路线与质控要点解析
已经有0人回复
-
AM630（CAS 164178-33-0）：CB2 选择性配体的实验使用与供应要点
已经有0人回复
-
ADC标杆分子T-DM1全解析：从结构设计到实验室应用的技术要点
已经有0人回复
-
HILIC磁珠研究蛋白组学怎么做？
已经有0人回复
-
His标签蛋白纯化怎么才能快？
已经有0人回复
-
WRN变构抑制剂HRO761：从D1/D2界面锁定到MSI合成致死的工具化合物深度解析
已经有0人回复
-
KRAS G12V(ON) 选择性抑制剂 RMC-5127：从三元复合物机制到科研应用
已经有0人回复
2楼2015-01-11 21:43:01
18761615793
木虫 (正式写手)
小虫
- MolEPI: 1
- 应助: 172 (高中生)
- 金币: 646.4
- 散金: 170
- 红花: 16
- 帖子: 863
- 在线: 144.9小时
- 虫号: 3603131
- 注册: 2014-12-19
- 专业: 抗体工程学
【答案】应助回帖
感谢参与，应助指数 +1
|
可能的原因有 ① 模板提取时候出现问题，PCR扩增的时候模板已经降解，无模板进行扩增，所以跑不出条带 ② 引物设计不合理，无法与模板结合进行延伸（但是这种可能性较小） ③ 反应体系的问题，就是酶的问题，不知道你用的是什么酶，酶的特异性太差，没有指导正确模板的扩增，反而产生了引物二聚体，如果是这样，换酶就行了 总的来说，着重考虑两方面原因：酶和模板，希望对你有所帮助 http://www.detaibio.com/relia-hotstart-polymerase.html |
3楼2015-01-12 09:10:45
