应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 连接转化
51/1返回列表
查看: 2214  |  回复: 8
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

xuxiaoxianer

银虫 (初入文坛)

[求助] 连接转化 已有4人参与

本人刚接触分子实验不久，还处于摸索阶段，反复实验遇到相同的问题，请路过的各位师兄师姐能不吝赐教，在下感激不尽。。。。
试验中 我提取材料的RNA反转录之后，PCR克隆出全长，如图00：MARKER条带七条，依次是100 250 500 750 1000 1500 2000  我的基因全长1300多bp,切胶回收后用PMD18-T进行连接，连接体系10ul  为（pcr回收产物4.5ul，PMD18-T 0.5ul，solutionI 5ul)，16度连接4小时，因为曾经做过16度4小时并没有连接上，所以又做了一组16度连接了13个小时，继续涂板转化，均长出菌落，挑菌摇菌后10个小时，也变混浊，但是做菌液pcr检测的结果却是弥散，同时做的另一个基因却做的很好。图11是16度连接4个小时的菌液pcr，图22是连接13个小时的菌液pcr，请大家帮忙看看到底是我哪里出了问题？（抱拳）

连接转化
11.jpg


连接转化-1
22.jpg


连接转化-2
00.jpg
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
1楼 2015-01-11 10:25:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xuxiaoxianer

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 晞朔 at 2015-01-11 13:29:29
建议重新扩增基因片段。回收之后再做检测，确定目的片段后，再做连接转化，稳妥些。从这个结果看，我不认为你扩增出来了可用以连接的目的片段。若目的基因没问题，那再看连接转化的细节把握。

应该是载体不合适，换了一种载体，艰难的得到了一个有条带的，谢谢你的回复~~
赞一下(1人) 回复此楼
7楼2015-01-29 09:10:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 9 个回答

cuihao102

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2015-01-11 15:32:18
建议你把质粒提出来跑电泳，再以质粒做模板扩增验证一下

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
2楼2015-01-11 10:46:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

晞朔

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+2, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2015-01-11 15:32:27
建议重新扩增基因片段。回收之后再做检测，确定目的片段后，再做连接转化，稳妥些。从这个结果看，我不认为你扩增出来了可用以连接的目的片段。若目的基因没问题，那再看连接转化的细节把握。
赞一下 回复此楼
3楼2015-01-11 13:29:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhangbighui

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
建议换个T载体，什么年代了还用18-T，效率低时间长，可以考虑全氏金的blunt sample T载体，T-3载体。再者，可考虑提取质粒酶切鉴定，PCR鉴定假阳性太多。
赞一下 回复此楼
成功，就是成为你想成为的人
4楼2015-01-11 19:47:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 9 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 欢迎发来filecode的Mz6后的代码验证其规律 +31 医学老男孩 2026-08-13 69/3450 2026-08-16 00:16 by mo_mo_mo_mo
[基金申请] 时间戳又变了8-15 +12 archvillain 2026-08-15 23/1150 2026-08-15 20:47 by foyo404
[基金申请] 哪位老哥知道今年的国自然具体哪一天放榜？ +7 Ldrop2023 2026-08-13 7/350 2026-08-15 15:57 by mzhh2000
[基金申请] 关于Filecode分析方法 +10 majunge000 2026-08-10 13/650 2026-08-15 12:26 by hanpeng972
[基金申请] 各位道友，我要去昆明玩几天，回来见。 +7 Tide man 2026-08-14 8/400 2026-08-15 01:11 by arzu_hma
[基金申请] 咱们一起用铁证分析2026国家社科基金中标与否 +7 启萌科技 2026-08-12 22/1100 2026-08-14 23:45 by Noways
[基金申请] 是这周出结果还是下周出结果？ +4 yuleib84 2026-08-11 4/200 2026-08-14 23:05 by lfy8008
[基金申请] 奇怪，两个人的filecode固定段从头到尾一模一样 +8 布布和一二 2026-08-10 11/550 2026-08-14 14:58 by Equinoxhua
[基金申请] filecode +15 documentary 2026-08-10 17/850 2026-08-14 10:08 by kissu88
[基金申请] FileCode能看出啥？ +10 要乐观耀哥 2026-08-10 32/1600 2026-08-14 09:37 by 要乐观耀哥
[基金申请] 我的国基提前知道中了，可是同事的操作让我实在接受不了，怎么会有这样的人 +10 家与远方 2026-08-10 15/750 2026-08-14 02:08 by 绵羊哥哥
[文学芳草园] 阿姨 +4 汪汪锅 2026-08-09 4/200 2026-08-13 19:43 by arzu_hma
[基金申请] 静等基金结果 +8 gjjjzhong 2026-08-10 21/1050 2026-08-13 17:56 by 且听虎啸
[基金申请] 不应该看fileCode +7 且听虎啸 2026-08-12 9/450 2026-08-13 14:27 by flydreamws
[基金申请] 分享一下我之前已中青C的计划书的filecode +4 布布和一二 2026-08-11 5/250 2026-08-13 12:56 by cratir
[基金申请] 结合人工智能，周易传统文化，filecode打分制来了，3分以上希望很大。 +3 Tide man 2026-08-12 4/200 2026-08-13 08:35 by ZJTJZ
[基金申请] 帮忙看看fileCode +7 wwncly 2026-08-10 13/650 2026-08-11 19:36 by 冰心玉壶晴
[基金申请] 确定了，国自然21号放榜 +6 布布和一二 2026-08-10 7/350 2026-08-10 19:15 by 2000zf36392
[基金申请] 国自然结果 +4 Vierhys 2026-08-10 8/400 2026-08-10 15:06 by Vierhys
[基金申请] 面上项目filecode邪修 +5 西山十月 2026-08-09 7/350 2026-08-10 07:32 by 仁砚薪传
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭