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连接转化 已有4人参与
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本人刚接触分子实验不久，还处于摸索阶段，反复实验遇到相同的问题，请路过的各位师兄师姐能不吝赐教，在下感激不尽。。。。 试验中 我提取材料的RNA反转录之后，PCR克隆出全长，如图00：MARKER条带七条，依次是100 250 500 750 1000 1500 2000 我的基因全长1300多bp,切胶回收后用PMD18-T进行连接，连接体系10ul 为（pcr回收产物4.5ul，PMD18-T 0.5ul，solutionI 5ul)，16度连接4小时，因为曾经做过16度4小时并没有连接上，所以又做了一组16度连接了13个小时，继续涂板转化，均长出菌落，挑菌摇菌后10个小时，也变混浊，但是做菌液pcr检测的结果却是弥散，同时做的另一个基因却做的很好。图11是16度连接4个小时的菌液pcr，图22是连接13个小时的菌液pcr，请大家帮忙看看到底是我哪里出了问题？（抱拳）  11.jpg  22.jpg  00.jpg |
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zhangbighui
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