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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 药学 » 药物分析 » HPLC的峰面积问题
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南瓜炒葡萄

新虫 (初入文坛)

[求助] HPLC的峰面积问题 已有2人参与

新手一枚~最近在做稳定性实验，但是HPLC峰面积很诡异，求大牛指导！
1、我用的机子是岛津LC-2010AHT
2、色谱柱是wondasil c18
3、色谱条件：甲醇：磷酸水（0.15）为40：60，柱温30摄氏度，进样体积20微升，流速0.8ml/min。
4、出峰时间在8.8min左右，理论塔板数3000，分离度0.2-0，拖尾因子1.3左右
5、同一样品连续进样6针，每针峰面积差距都比较大，而且没有规律，忽大忽小。如果是样品存在降解问题，峰面积应该越来越小才对，现在的情况是峰面积一会大，一会小。第一针可能是一百万，第二针就可能是两百万，第三针又变为一百多万，毫无规律可言。
6、这根色谱柱不是新的，之前的流动相是磷酸盐缓冲溶液，会不会是之前已经伤害到柱子了？
7、会不会是色谱条件不适应造成的？
8、紫外灯使用时间3100小时，能量大于800，我觉得不是紫外灯的问题
9、会不会是样品过载了？
10、柱压是稳定的，也木有漏夜

请大神指点~有没有说清楚的地方清指出，本人新手一枚，跪谢！
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1楼 2015-01-06 22:26:25
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voyager88

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
本人认为可能原因有下
1.样品不是均相溶液，建议换个溶样溶剂，进样钱晃一晃试试
2.样品容易让粘度太大，降低进样针抽液速度
3.如果是手动进样，手法有问题，自动进样的进样器可能有问题
4.洗一下进样针看看
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微信公众号：Pharmaguider（药事纵横），主页：www.pharmaguider.cn
2楼2015-01-07 08:39:33
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南瓜炒葡萄

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by voyager88 at 2015-01-07 08:39:33
本人认为可能原因有下
1.样品不是均相溶液，建议换个溶样溶剂，进样钱晃一晃试试
2.样品容易让粘度太大，降低进样针抽液速度
3.如果是手动进样，手法有问题，自动进样的进样器可能有问题
4.洗一下进样针看看

谢谢啊，
1、我是自动进样
2、样品是1ml母液+5ml25%甲醇，混合后摇匀，0.45微米滤膜滤过，再进样的。所以样品溶液应该粘度不大。
3、自动进样针怎么洗？
4、我头一个样品峰面积还在二百万左右（四针），后面样品的峰面积就变成了九万左右（四针），然后又重新进样，又变成了二百万左右，是不是进样量不确定啊
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3楼2015-01-07 08:49:43
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voyager88

金虫 (著名写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 南瓜炒葡萄 at 2015-01-07 08:49:43
谢谢啊，
1、我是自动进样
2、样品是1ml母液+5ml25%甲醇，混合后摇匀，0.45微米滤膜滤过，再进样的。所以样品溶液应该粘度不大。
3、自动进样针怎么洗？
4、我头一个样品峰面积还在二百万左右（四针），后面样 ...

是不是样品里有气泡，或者是样品溶解不好，你把样品超声一下，瓶盖子拧松点，保证样品量在瓶子的2/3左右，再进了看看，实在不行打电话问工程师
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» 本帖已获得的红花（最新10朵）

南瓜炒葡萄
微信公众号：Pharmaguider（药事纵横），主页：www.pharmaguider.cn
4楼2015-01-07 09:49:52
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喵喵与咩咩

铁杆木虫 (著名写手)

要把生活过成诗和远方

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
南瓜炒葡萄: 金币+20, ★★★★★最佳答案 2015-01-08 08:20:19
很有可能你进样的样品已经超载，严重超载。建议将样品稀释1000倍以后再试试
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生命不息，奋斗不止
5楼2015-01-07 14:31:41
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南瓜炒葡萄

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 喵喵与咩咩 at 2015-01-07 14:31:41
很有可能你进样的样品已经超载，严重超载。建议将样品稀释1000倍以后再试试

是的，的确是载样量过大引起的 ，谢谢啦。怎么给你金币？
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6楼2015-01-07 22:22:30
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南瓜炒葡萄

新虫 (初入文坛)
送红花一朵
引用回帖:
4楼: Originally posted by voyager88 at 2015-01-07 09:49:52
是不是样品里有气泡，或者是样品溶解不好，你把样品超声一下，瓶盖子拧松点，保证样品量在瓶子的2/3左右，再进了看看，实在不行打电话问工程师...

谢谢啦，问题解决啦，金币只能给一个人，我送你花吧~
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7楼2015-01-07 22:23:17
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匿名

禁虫 (知名作家)
本帖仅楼主可见
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8楼2015-01-08 04:29:52
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