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HPLC的峰面积问题 已有2人参与
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新手一枚~最近在做稳定性实验，但是HPLC峰面积很诡异，求大牛指导！ 1、我用的机子是岛津LC-2010AHT 2、色谱柱是wondasil c18 3、色谱条件：甲醇：磷酸水（0.15）为40：60，柱温30摄氏度，进样体积20微升，流速0.8ml/min。 4、出峰时间在8.8min左右，理论塔板数3000，分离度0.2-0，拖尾因子1.3左右 5、同一样品连续进样6针，每针峰面积差距都比较大，而且没有规律，忽大忽小。如果是样品存在降解问题，峰面积应该越来越小才对，现在的情况是峰面积一会大，一会小。第一针可能是一百万，第二针就可能是两百万，第三针又变为一百多万，毫无规律可言。 6、这根色谱柱不是新的，之前的流动相是磷酸盐缓冲溶液，会不会是之前已经伤害到柱子了？ 7、会不会是色谱条件不适应造成的？ 8、紫外灯使用时间3100小时，能量大于800，我觉得不是紫外灯的问题 9、会不会是样品过载了？ 10、柱压是稳定的，也木有漏夜 请大神指点~有没有说清楚的地方清指出，本人新手一枚，跪谢！ |
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