应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 药学 » 药物分析 » HPLC的峰面积问题
81/1返回列表
查看: 3201  |  回复: 7
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

南瓜炒葡萄

新虫 (初入文坛)

[求助] HPLC的峰面积问题 已有2人参与

新手一枚~最近在做稳定性实验，但是HPLC峰面积很诡异，求大牛指导！
1、我用的机子是岛津LC-2010AHT
2、色谱柱是wondasil c18
3、色谱条件：甲醇：磷酸水（0.15）为40：60，柱温30摄氏度，进样体积20微升，流速0.8ml/min。
4、出峰时间在8.8min左右，理论塔板数3000，分离度0.2-0，拖尾因子1.3左右
5、同一样品连续进样6针，每针峰面积差距都比较大，而且没有规律，忽大忽小。如果是样品存在降解问题，峰面积应该越来越小才对，现在的情况是峰面积一会大，一会小。第一针可能是一百万，第二针就可能是两百万，第三针又变为一百多万，毫无规律可言。
6、这根色谱柱不是新的，之前的流动相是磷酸盐缓冲溶液，会不会是之前已经伤害到柱子了？
7、会不会是色谱条件不适应造成的？
8、紫外灯使用时间3100小时，能量大于800，我觉得不是紫外灯的问题
9、会不会是样品过载了？
10、柱压是稳定的，也木有漏夜

请大神指点~有没有说清楚的地方清指出，本人新手一枚，跪谢！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2015-01-06 22:26:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

voyager88

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
本人认为可能原因有下
1.样品不是均相溶液，建议换个溶样溶剂，进样钱晃一晃试试
2.样品容易让粘度太大，降低进样针抽液速度
3.如果是手动进样，手法有问题，自动进样的进样器可能有问题
4.洗一下进样针看看
赞一下 回复此楼
微信公众号：Pharmaguider（药事纵横），主页：www.pharmaguider.cn
2楼2015-01-07 08:39:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

南瓜炒葡萄

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by voyager88 at 2015-01-07 08:39:33
本人认为可能原因有下
1.样品不是均相溶液，建议换个溶样溶剂，进样钱晃一晃试试
2.样品容易让粘度太大，降低进样针抽液速度
3.如果是手动进样，手法有问题，自动进样的进样器可能有问题
4.洗一下进样针看看

谢谢啊，
1、我是自动进样
2、样品是1ml母液+5ml25%甲醇，混合后摇匀，0.45微米滤膜滤过，再进样的。所以样品溶液应该粘度不大。
3、自动进样针怎么洗？
4、我头一个样品峰面积还在二百万左右（四针），后面样品的峰面积就变成了九万左右（四针），然后又重新进样，又变成了二百万左右，是不是进样量不确定啊
赞一下 回复此楼
3楼2015-01-07 08:49:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

voyager88

金虫 (著名写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 南瓜炒葡萄 at 2015-01-07 08:49:43
谢谢啊，
1、我是自动进样
2、样品是1ml母液+5ml25%甲醇，混合后摇匀，0.45微米滤膜滤过，再进样的。所以样品溶液应该粘度不大。
3、自动进样针怎么洗？
4、我头一个样品峰面积还在二百万左右（四针），后面样 ...

是不是样品里有气泡，或者是样品溶解不好，你把样品超声一下，瓶盖子拧松点，保证样品量在瓶子的2/3左右，再进了看看，实在不行打电话问工程师
赞一下 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

南瓜炒葡萄
微信公众号：Pharmaguider（药事纵横），主页：www.pharmaguider.cn
4楼2015-01-07 09:49:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

喵喵与咩咩

铁杆木虫 (著名写手)

要把生活过成诗和远方

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
南瓜炒葡萄: 金币+20, ★★★★★最佳答案 2015-01-08 08:20:19
很有可能你进样的样品已经超载，严重超载。建议将样品稀释1000倍以后再试试
赞一下 回复此楼
生命不息，奋斗不止
5楼2015-01-07 14:31:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

南瓜炒葡萄

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 喵喵与咩咩 at 2015-01-07 14:31:41
很有可能你进样的样品已经超载，严重超载。建议将样品稀释1000倍以后再试试

是的，的确是载样量过大引起的 ，谢谢啦。怎么给你金币？
赞一下 回复此楼
6楼2015-01-07 22:22:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

南瓜炒葡萄

新虫 (初入文坛)
送红花一朵
引用回帖:
4楼: Originally posted by voyager88 at 2015-01-07 09:49:52
是不是样品里有气泡，或者是样品溶解不好，你把样品超声一下，瓶盖子拧松点，保证样品量在瓶子的2/3左右，再进了看看，实在不行打电话问工程师...

谢谢啦，问题解决啦，金币只能给一个人，我送你花吧~
赞一下 回复此楼
7楼2015-01-07 22:23:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

匿名

禁虫 (知名作家)
本帖仅楼主可见
赞一下
8楼2015-01-08 04:29:52
已阅   申请PhEPI   回复此楼   编辑   查看我的主页
相关版块跳转 我要订阅楼主 南瓜炒葡萄 的主题更新
81/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[教师之家] 为什么余额宝的年化利率越来越低？主要原因有哪些？ +5 瞬息宇宙 2026-08-15 5/250 2026-08-19 20:23 by super2002521
[基金申请] 欢迎发来filecode的Mz6后的代码验证其规律 +54 医学老男孩 2026-08-13 120/6000 2026-08-19 20:15 by Janus2024
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 cHIDTWCTtLlG 2026-08-19 6/300 2026-08-19 18:52 by oCMhZAsgNFoO
[基金申请] 今天放榜吗？ +14 布布和一二 2026-08-19 15/750 2026-08-19 18:07 by gltch
[博后之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 PnssoZglMj3v 2026-08-19 3/150 2026-08-19 18:04 by oCMhZAsgNFoO
[考博] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 PnssoZglMj3v 2026-08-19 4/200 2026-08-19 17:54 by oCMhZAsgNFoO
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 PnssoZglMj3v 2026-08-19 5/250 2026-08-19 17:42 by oCMhZAsgNFoO
[基金申请] filecode，4个jtjc了 +10 ziyangfang 2026-08-19 11/550 2026-08-19 17:19 by wdc28
[基金申请] filecode=后面第一个是大写字母 +10 wangze12014 2026-08-14 12/600 2026-08-19 16:56 by 苦难博士
[基金申请] 时间戳变了，能看出什么问题？ +10 基诺咪客 2026-08-17 14/700 2026-08-19 10:34 by 基诺咪客
[基金申请] 快农历七夕节了，轻松一下，男人悄悄话，女施主请不要进来。 +6 Tide man 2026-08-14 7/350 2026-08-19 09:56 by ZJTJZ
[基金申请] 重要消息，中午系统在维护 +10 yuleib84 2026-08-18 11/550 2026-08-19 07:30 by 羽毛枫f
[基金申请] 明天放榜？ +5 Shxjjxjkx 2026-08-18 5/250 2026-08-18 18:14 by -大大大大大-
[论文投稿] 投稿咨询 +4 wwm09 2026-08-17 6/300 2026-08-18 15:36 by wwm09
[基金申请] 时间戳又变了8-15 +14 archvillain 2026-08-15 26/1300 2026-08-18 13:37 by phantomgost
[基金申请] 今天维护系统维护 祝所有人 高中 +8 gjjjzhong 2026-08-18 9/450 2026-08-18 13:01 by 家与远方
[基金申请] 哪位老哥知道今年的国自然具体哪一天放榜？ +13 Ldrop2023 2026-08-13 16/800 2026-08-18 12:25 by 淀粉搬运工
[基金申请] 93BebMhtakh前后11位开头都是大写 +4 且听虎啸 2026-08-17 5/250 2026-08-18 00:49 by 蔡棒棒菂
[基金申请] 今天系统多次维护，明天很可能放榜！ +8 zju2000 2026-08-16 9/450 2026-08-17 12:20 by lmz0216
[基金申请] 各位道友，我要去昆明玩几天，回来见。 +7 Tide man 2026-08-14 8/400 2026-08-15 01:11 by arzu_hma
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭