| 查看: 3528 | 回复: 23 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
berry94铁虫 (初入文坛)
|
[求助]
高GC含量目的基因的克隆 已有14人参与
|
||
| 大家好，我要克隆一个1.2K的目的基因，GC含量70%，克隆了很长时间了，一直没有什么进展，特地来向前辈们求助。个人认为RNA提取应该是很好的，一直觉着反转录得不好，我用的promega A5000的反转录试剂盒，48度、50度反转过，都没有扩出条带，做RACE也没有得到结果，所以希望有经验者提下意见，让晚辈进步！ |
回复此楼» 猜你喜欢
湖北师范大学招调剂啦
已经有9人回复
-
邵阳学院食品与化学工程学院硕士调剂
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有261人回复
-
天津商业大学 生物与医药课题组招生
已经有0人回复
-
生物化工学硕招收调剂
已经有0人回复
-
广东石油化工学院2026年硕士研究生需要多名生物，制药工程，食品专业的调剂生
已经有0人回复
-
化工申博
已经有3人回复
-
申博自荐
已经有3人回复
-
广西民族大学化学化工学院化学工程与技术学硕，材料化工专硕调剂名额充足！
已经有0人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
18761615793
木虫 (正式写手)
小虫
- MolEPI: 1
- 应助: 172 (高中生)
- 金币: 646.4
- 散金: 170
- 红花: 16
- 帖子: 863
- 在线: 144.9小时
- 虫号: 3603131
- 注册: 2014-12-19
- 专业: 抗体工程学
【答案】应助回帖
★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回贴交流 2015-01-07 22:46:14
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回贴交流 2015-01-07 22:46:14
|
您好 扩增不出来，其实对于GC含量高的模板来说，主要是buffer要合适，普通的Taq酶的试剂盒只会有一种buffer，镁离子也是另外加进去的，或者还要在扩增的时候加入DMSO优化等等，这样很麻烦，扩增不出来，所以要先找到合适的buffer，购买的试剂盒中带有两种buffer，分别用于普通模板和高GC模板扩增。而且你用的宝生物的primestar，具有一定的保真性，最好不要用这个酶，扩增中它会将你的模板全部降解掉 所以电泳结束后没有条带。可以换成热启动Taq酶，不会降解模板和引物又能避免非特异性产物产生，个人使用过Relia热启动Taq聚合酶还是不错的，可以一试， http://www.biomart.cn/infosupply/19906627.htm |
14楼2015-01-07 09:36:59
2楼2015-01-04 20:40:19
3楼2015-01-05 09:12:45
berry94
铁虫 (初入文坛)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 10
- 散金: 10
- 帖子: 36
- 在线: 8.8小时
- 虫号: 2877739
- 注册: 2013-12-17
- 性别: MM
- 专业: 细胞增殖、生长与分化
4楼2015-01-05 16:53:34
5