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berry94

铁虫 (初入文坛)

[求助] 高GC含量目的基因的克隆 已有14人参与

大家好,我要克隆一个1.2K的目的基因,GC含量70%,克隆了很长时间了,一直没有什么进展,特地来向前辈们求助。个人认为RNA提取应该是很好的,一直觉着反转录得不好,我用的promega A5000的反转录试剂盒,48度、50度反转过,都没有扩出条带,做RACE也没有得到结果,所以希望有经验者提下意见,让晚辈进步!
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小刀188

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回贴交流 2015-01-07 22:44:24
加点GC—buffer再做一下,GC含量高很难克隆的
3楼2015-01-05 09:12:45
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稻稻

铜虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
用的什么酶?个人认为酶是关键

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
做一个不动声色的人,不准情绪化,不准回头看。
2楼2015-01-04 20:40:19
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berry94

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 稻稻 at 2015-01-04 20:40:19
用的什么酶?个人认为酶是关键

宝生物的primestar酶,我觉得我反转的效果可能不好,大侠觉得promega的A5000 48度能反转出我的cDNA吗
实验快快出结果
4楼2015-01-05 16:53:34
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berry94

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 小刀188 at 2015-01-05 09:12:45
加点GC—buffer再做一下,GC含量高很难克隆的

我用的就是primestar with GC buffer 呢,您觉得我在反转上应该怎么做呢
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5楼2015-01-05 16:55:02
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