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tianti_121新虫 (小有名气)
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PCR条带淡，怎样优化？（如图） 已有12人参与
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菌液PCR，反应体系：菌液0.5，引物各1，Fastpfu buffer 5，dNTP 2.5，Fastpfu酶 0.5，ddH2O 14.5，共25微升。 PCR程序：94℃ 4min， 94℃ 30s 62℃ 30s 72℃ 2min 35个循环 72℃ 10min 目的基因大概1300多bp. 求优化条件！十分感谢！   高保真菌液PCR.jpg |
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18761615793
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【答案】应助回帖
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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-01-14 20:07:27
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-01-14 20:07:27
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还是pfu的问题，普通PCR不建议使用，可能会使模板引物降解或者使扩增出来的新模板链降解，如果担心普通的Taq酶扩增不出结果的话，可以使用热启动Taq酶 http://www.detaibio.com/relia-hotstart-polymerase.html 热启动Taq酶 特异性灵敏度均高于普通的Taq酶 |
22楼2015-01-13 17:09:49
zhaodahe
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2楼2014-12-28 12:03:51
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3楼2014-12-28 12:19:31
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4楼2014-12-28 12:30:47
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