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转染质粒后，细胞死亡了一半，显微镜下看，一个视野只有三四个细胞转进去了， 已有2人参与
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| 应该能排除lipo的原因，因为单独加lipo的没事，查了网上说可能leaking expression导致的，但不是很明白，求大家解答，谢谢！ |
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没人理我吗？摸索了两个多月了，依然徒劳！
2楼2014-12-24 14:51:51
fuyuandj86
版主 (著名写手)
己所不欲，勿施于人
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3楼2014-12-25 08:34:43
【答案】应助回帖
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这种情况有很多种原因： 1. 转染的量过大。单独转Lipo不加质粒的时候细胞是绝对不会死很多的，这点请放心。但是转染剂量过大细胞就会死亡很多，例如6孔板，我一般转2-3ug,但是如果你转了5ug，细胞就肯定会死一些。同时如果Lipo2000的量过大也会死，例如lipo2000:质粒=2:1 时，其实虽然效率高了但是毒性是很强的，工程细胞如293推荐用1:1转就绝对可以。 2. 细胞脆弱。 细胞的培养条件，细胞的种类，细胞的状态都会导致细胞的脆弱程度不一样。有一些原代细胞比较容易死亡倒的确是真的。普通的工程细胞的话基本死亡率不会很高。这就是基础了，如何养好细胞，你可以自己找找资料。 3. 转染后换液时间。过去lipo2000说明书上写着不建议带着血清转染，但是现在可能是竞争原因又改成可以血清转染了。所以如果你还是按照前人的方法（其实也是效果最好的方法）即转染前细胞换液opti-MEM, 转染后4-6h换培养基+血清的话，就要注意转染时间了，超过6h，毒性过强细胞肯定会死很多。如果是普通的293类的细胞，个人验证过，带着血清转染也是没问题的而且不用再单独换一次液，但是最好不要带抗生素。 4. lipo2000问题。 水货很多，如果你保证自己用的是正品行货，也不排除这个批次的毒性过强。（此条几率很小） |
4楼2014-12-25 13:47:43
5楼2014-12-25 13:49:07
6楼2014-12-29 00:35:16
