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guyue900905新虫 (初入文坛)
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[求助]
我想体外大量表达某一基因以获得大量目的物质，不知道该怎么做呀～～～ 已有2人参与
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我自己现在有点思路，从乳酸菌里提出DNA,进行PCR扩增，然后跑胶进行胶回收，转到大肠杆菌感受态细胞中，筛选出阳性克隆，之后该怎么做那？对阳性克隆进行培养？之后的代谢产物中怎么筛出我想要的目的物质那？ 还是说我这么个思路就是不对的。求教高手指点一二，自己很糊涂，谢谢您啦！！！ |
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【答案】应助回帖
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kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2015-01-07 16:47:42
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2015-01-07 16:47:42
| 你的目的就是获得目的蛋白是吧，你之前的思路是对的，首先PCR获得目的基因，将其构建到原核载体中,载体可以是HIS标签的PET系列表达质粒载体或GST标签的PGEX系列表达质粒载体，筛选出阳性克隆后，将阳性质粒转入用于表达的感受态中，注意培养基中要加IPTG诱导剂诱导目的蛋白大量表达，然后就可以用相应的柱子纯化了 |
guyue900905
3楼2014-12-28 14:51:00
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2楼2014-12-24 11:13:20
guyue900905
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4楼2015-01-06 09:47:57
10