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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 具有高活性的抗原和酶制备一般流程（体外诊断用）
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huyan0817

木虫 (正式写手)

[求助] 具有高活性的抗原和酶制备一般流程（体外诊断用） 已有2人参与

最近在公司做几个项目关于抗原和酶，表达出来的蛋白活性很差（跟目前商业化的同类型蛋白相比），我们用的序列均是专利上提供的。请问下大神如何提高目的蛋白质的活性？谢谢！！！
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1楼 2014-12-05 11:06:21
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bio_sci

捐助贵宾 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
huyan0817: 金币+1 2014-12-05 16:50:25
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-12-05 21:43:29
专利都是假的，不能信

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2楼2014-12-05 13:39:53
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pennchem

专家顾问 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-12-05 21:43:37
问题太笼统，没有办法回答，

一个方法是纯化的每一步都测酶的活性

有可能是序列问题，有可能是表达条件问题，有可能是纯化问题，有可能是保存条件问题。
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行至水穷处，坐看云起时
3楼2014-12-05 21:32:42
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huyan0817

木虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by pennchem at 2014-12-05 21:32:42
问题太笼统，没有办法回答，

一个方法是纯化的每一步都测酶的活性

有可能是序列问题，有可能是表达条件问题，有可能是纯化问题，有可能是保存条件问题。

我是pET28表达系统，低温过夜诱导，超声破碎，然后亲和纯化，透析过夜，测浓度，电泳确定，最后用试剂盒测酶活。测出来的酶活很低只有别人的30%，有一个酶甚至一点酶活也没有。抗原的也是这个过程。总的来说我们自己弄的东西就是比市场上的差很多，目前就是没有一个具体的方法来做，都是大家自己乱搞，没有具体的一个可行性方案，这个是最大的问题；很多时候做了大量的工作就是没有成果。
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4楼2014-12-07 13:19:04
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pennchem

专家顾问 (正式写手)

【答案】应助回帖

这个流程是标准的，不是每一步都做了质检
（1）表达细菌破碎后
（2）离心样品上柱前
（3）纯化后
（4）透析前
（5）老化试验（1天，1星期，一个月，半年，一年）
虽然很繁琐，但是如果每一步都能测出活性而且能够比较，就可以知道这些步骤中活性变化的情况，可以用来改进工艺流程。

还有，酶活只有别人的30%，这个结论是怎么来的？ 怎么测的酶活？ 如果加大3倍，能做到一样的活性吗？
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行至水穷处，坐看云起时
5楼2014-12-07 15:25:41
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huyan0817

木虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by pennchem at 2014-12-07 15:25:41
这个流程是标准的，不是每一步都做了质检
（1）表达细菌破碎后
（2）离心样品上柱前
（3）纯化后
（4）透析前
（5）老化试验（1天，1星期，一个月，半年，一年）
虽然很繁琐，但是如果每一步都能测出活性而且 ...

前几步没有做活性检测，只有最后透析后做的酶活检测！30%是去他部门用试剂盒检测的，得出的结论，我们部门只管做原料！
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6楼2014-12-08 13:12:32
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