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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 问下大家这个跑胶图最下面的条带是二聚体吗？怎么除不掉
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eskimo_0_0

铁虫 (初入文坛)

[求助] 问下大家这个跑胶图最下面的条带是二聚体吗？怎么除不掉 已有1人参与

这两幅图分别是昨天和今天做的细菌菌落的目的基因pcr，共有5个基因，片段长均在100-200bp。引物在设计的时候基本都是选择的没有二聚体的。
第一幅图是昨天做的结果，1μl 浓度为10μM的引物，分别用了60-58-52依次降低的退火温度，退火时间55s。上样量5μl。发现下面有亮的宽带，今天就重复做了一次。
今天引物用了10μM的引物0.2、0.5、1μl三个浓度，60-55-50依次降低的退火温度，退火时间30s。上样量2.5μl，还是有最下面的亮的宽带。
另外今天多挑了一些菌，增大了模板量，昨天的结果感觉已经有拖尾了应该就是模板量太大的原因吧。菌是直接挑的没有煮沸。

想问下大家最下面宽的亮的带是二聚体么，这个可以避免么，还是所有pcr产物的跑胶结果都会有这个带。
因为这个是想给q-pcr设计的引物，所以不知道这个东西有没有影响。

问下大家这个跑胶图最下面的条带是二聚体吗？怎么除不掉
2014-11-26.jpg


问下大家这个跑胶图最下面的条带是二聚体吗？怎么除不掉-1
2014-11-27.png
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1楼 2014-11-27 19:39:22
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eskimo_0_0

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by jurkat.1640 at 2014-11-28 09:17:14
引物大概25 bp大小，你的引物加多了，只要过剩就有。

可是我稀释了引物还是有呀

下面的图三个为一组 引物浓度依次稀释过了的
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3楼2014-11-28 11:06:16
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-11-28 12:54:12
引物大概25 bp大小，你的引物加多了，只要过剩就有。
赞一下 回复此楼
2楼2014-11-28 09:17:14
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