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问下大家这个跑胶图最下面的条带是二聚体吗？怎么除不掉 已有1人参与
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这两幅图分别是昨天和今天做的细菌菌落的目的基因pcr，共有5个基因，片段长均在100-200bp。引物在设计的时候基本都是选择的没有二聚体的。 第一幅图是昨天做的结果，1μl 浓度为10μM的引物，分别用了60-58-52依次降低的退火温度，退火时间55s。上样量5μl。发现下面有亮的宽带，今天就重复做了一次。 今天引物用了10μM的引物0.2、0.5、1μl三个浓度，60-55-50依次降低的退火温度，退火时间30s。上样量2.5μl，还是有最下面的亮的宽带。 另外今天多挑了一些菌，增大了模板量，昨天的结果感觉已经有拖尾了应该就是模板量太大的原因吧。菌是直接挑的没有煮沸。 想问下大家最下面宽的亮的带是二聚体么，这个可以避免么，还是所有pcr产物的跑胶结果都会有这个带。 因为这个是想给q-pcr设计的引物，所以不知道这个东西有没有影响。  2014-11-26.jpg  2014-11-27.png |
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3楼2014-11-28 11:06:16
jurkat.1640
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2楼2014-11-28 09:17:14