24小时热门版块排行榜    

查看: 617  |  回复: 4
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

zzlei

金虫 (小有名气)

[求助] 蛋白表达 已有2人参与

BL21菌株,0.4mM IPTG, 30度诱导五个小时,水溶性蛋白,表达量还算高,但过完镍柱洗脱跑电泳时,发现杂蛋白也很多。本以为是洗脱的问题,但尝试了好多次还是洗不干净。是不是表达出了问题?应该怎么改进? 希望各位支招
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zzlei

金虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by hajierlove at 2014-11-27 11:52:39
楼主,你好,最近也在做这方面的,想咨询一下,你是直接去上清过柱子纯化吗?沉淀用PBS溶解,破碎,离心取上清可以过柱子吗?

溶解,破碎,离心,取上清液过柱子。我做的水溶性蛋白
5楼2014-11-27 12:00:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 5 个回答

灰血动物

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
请问是不是用咪唑洗脱的 ,洗脱前有没有优化过它的浓度?
未完成
2楼2014-11-26 11:58:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zzlei

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 灰血动物 at 2014-11-26 11:58:59
请问是不是用咪唑洗脱的 ,洗脱前有没有优化过它的浓度?

嗯,用咪唑洗的,浓度优化好的,但是杂蛋白分不开,跑胶如图。
蛋白表达
MediaLib_Camera Roll_WP_20141124_001.jpg

3楼2014-11-26 16:45:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hajierlove

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
楼主,你好,最近也在做这方面的,想咨询一下,你是直接去上清过柱子纯化吗?沉淀用PBS溶解,破碎,离心取上清可以过柱子吗?
踏实
4楼2014-11-27 11:52:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考博] 澳大利亚 Murdoch University 全奖博士招生(3个名额)地质化工冶金领域 +38 AI8RaGaPaSCR 2026-08-07 40/2000 2026-08-13 23:45 by 9kfQ6ZJVaWOC
[基金申请] 关于Filecode分析方法 +9 majunge000 2026-08-10 12/600 2026-08-13 23:20 by iwuli
[基金申请] 欢迎发来filecode的Mz6后的代码验证其规律 +10 医学老男孩 2026-08-13 28/1400 2026-08-13 22:44 by 医学老男孩
[基金申请] 小木虫上这么多卖论文的,真有人买论文么?感觉没必要啊 +9 Tide man 2026-08-10 10/500 2026-08-13 20:33 by 温淼淼淼
[文学芳草园] 阿姨 +4 汪汪锅 2026-08-09 4/200 2026-08-13 19:43 by arzu_hma
[基金申请] FileCode能看出啥? +10 要乐观耀哥 2026-08-10 28/1400 2026-08-13 17:51 by 医学老男孩
[基金申请] filecode +14 documentary 2026-08-10 16/800 2026-08-13 16:39 by 润生71
[基金申请] 结合人工智能,周易传统文化,filecode打分制来了,3分以上希望很大。 +3 Tide man 2026-08-12 4/200 2026-08-13 08:35 by ZJTJZ
[基金申请] 2019年青年基金涵评意见,大家看看几个A,几个B? +11 Tide man 2026-08-11 11/550 2026-08-13 07:35 by 撸猫猫
[基金申请] 应该是93bebmhtak前后十一个字符比较关键 +22 Lanmanbaby 2026-08-09 36/1800 2026-08-12 22:50 by sdfapple719
[基金申请] 奇怪,两个人的filecode固定段从头到尾一模一样 +7 布布和一二 2026-08-10 10/500 2026-08-12 09:12 by 布布和一二
[基金申请] 综述论文作为代表作会不会影响评审专家的印象分? +11 yufeiwaner 2026-08-09 13/650 2026-08-12 08:17 by yufeiwaner
[硕博家园] 读博的好处 +3 lnee 2026-08-11 3/150 2026-08-11 18:10 by 希望我好好的
[基金申请] 确定了,国自然21号放榜 +6 布布和一二 2026-08-10 7/350 2026-08-10 19:15 by 2000zf36392
[基金申请] 据悉今年马上要出结果了 +7 瞬息宇宙 2026-08-10 8/400 2026-08-10 12:42 by Vivilian
[基金申请] 2026国自然放榜时间 +9 布布和一二 2026-08-08 9/450 2026-08-10 11:22 by xxxx2020
[基金申请] 关于filecode,很负责任的告诉大家 +6 爱看书的可乐 2026-08-08 7/350 2026-08-08 22:13 by a_niu
[基金申请] 国基金的申报应该改成非等额制,评价高的钱多评价低的钱少,但是增加资助率 +7 a089 2026-08-07 7/350 2026-08-08 18:05 by gltch
[基金申请] 关于filecode +4 布布和一二 2026-08-07 7/350 2026-08-07 22:55 by zhanghaozhu
[基金申请] 化学口download_prp&fileCode的固定段好像这几天一直没变,有变的大神么? +3 Tide man 2026-08-07 4/200 2026-08-07 22:39 by Tide man
信息提示
请填处理意见