24小时热门版块排行榜    

查看: 576  |  回复: 4

zzlei

金虫 (小有名气)

[求助] 蛋白表达 已有2人参与

BL21菌株,0.4mM IPTG, 30度诱导五个小时,水溶性蛋白,表达量还算高,但过完镍柱洗脱跑电泳时,发现杂蛋白也很多。本以为是洗脱的问题,但尝试了好多次还是洗不干净。是不是表达出了问题?应该怎么改进? 希望各位支招
回复此楼

» 猜你喜欢

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

灰血动物

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
请问是不是用咪唑洗脱的 ,洗脱前有没有优化过它的浓度?
未完成
2楼2014-11-26 11:58:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zzlei

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 灰血动物 at 2014-11-26 11:58:59
请问是不是用咪唑洗脱的 ,洗脱前有没有优化过它的浓度?

嗯,用咪唑洗的,浓度优化好的,但是杂蛋白分不开,跑胶如图。
蛋白表达
MediaLib_Camera Roll_WP_20141124_001.jpg

3楼2014-11-26 16:45:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hajierlove

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
楼主,你好,最近也在做这方面的,想咨询一下,你是直接去上清过柱子纯化吗?沉淀用PBS溶解,破碎,离心取上清可以过柱子吗?
踏实
4楼2014-11-27 11:52:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zzlei

金虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by hajierlove at 2014-11-27 11:52:39
楼主,你好,最近也在做这方面的,想咨询一下,你是直接去上清过柱子纯化吗?沉淀用PBS溶解,破碎,离心取上清可以过柱子吗?

溶解,破碎,离心,取上清液过柱子。我做的水溶性蛋白
5楼2014-11-27 12:00:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 zzlei 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 面上项目没有好文章就没希望了吗? +20 1234567wang 2026-06-07 22/1100 2026-06-14 14:40 by vito刘
[基金申请] 今年也是没消息就是没中么 +5 vito刘 2026-06-13 9/450 2026-06-14 11:31 by newfuzzy1
[考研] *O_o^ +3 jk31rb6vyz 2026-06-12 3/150 2026-06-14 09:08 by 8bmv3h4hvh
[找工作] *囍 +4 m584r2z4j3 2026-06-12 4/200 2026-06-14 09:06 by 8bmv3h4hvh
[硕博家园] T^T +7 m584r2z4j3 2026-06-11 8/400 2026-06-14 08:34 by 8bmv3h4hvh
[考博] →_→ +4 q1zg6x4lf3 2026-06-12 4/200 2026-06-14 08:28 by 8bmv3h4hvh
[公派出国] T^T +6 q1zg6x4lf3 2026-06-12 6/300 2026-06-14 08:28 by 8bmv3h4hvh
[考博] T^T +4 q1zg6x4lf3 2026-06-12 4/200 2026-06-14 08:26 by 8bmv3h4hvh
[考研] O(∩_∩)O +4 q1zg6x4lf3 2026-06-12 5/250 2026-06-14 08:23 by 8bmv3h4hvh
[硕博家园] O(∩_∩)O +6 jk31rb6vyz 2026-06-12 8/400 2026-06-14 08:10 by 8bmv3h4hvh
[公派出国] π_π +5 m584r2z4j3 2026-06-11 5/250 2026-06-14 08:08 by 8bmv3h4hvh
[找工作] 售SCI文章,我:8.O.5.51O.5.4,科目齐全,可十急 +3 q1zg6x4lf3 2026-06-12 3/150 2026-06-13 19:07 by 1js5n6upxm
[公派出国] +4 q1zg6x4lf3 2026-06-12 4/200 2026-06-13 19:05 by 1js5n6upxm
[考研] T^T +6 m584r2z4j3 2026-06-11 6/300 2026-06-13 18:29 by lkmi35jdzt
[文学芳草园] 咸菜 +3 myrtle 2026-06-10 3/150 2026-06-13 18:29 by ahsoarli
[考博] π_π +4 m584r2z4j3 2026-06-11 4/200 2026-06-13 18:25 by lkmi35jdzt
[考博] T^T +4 jk31rb6vyz 2026-06-12 4/200 2026-06-13 12:09 by 80j16ujcu8
[基金申请] 前几天时间戳更新了 +8 vito刘 2026-06-11 13/650 2026-06-12 14:17 by BlakeReary
[教师之家] AASSDDFF +3 m584r2z4j3 2026-06-11 3/150 2026-06-12 11:28 by zs48m4lz8g
[考博] 博士申请 +3 张城斐 2026-06-07 3/150 2026-06-08 09:15 by A大朋同学
信息提示
请填处理意见