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zzlei

金虫 (小有名气)

[求助] 蛋白表达 已有2人参与

BL21菌株,0.4mM IPTG, 30度诱导五个小时,水溶性蛋白,表达量还算高,但过完镍柱洗脱跑电泳时,发现杂蛋白也很多。本以为是洗脱的问题,但尝试了好多次还是洗不干净。是不是表达出了问题?应该怎么改进? 希望各位支招
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灰血动物

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
请问是不是用咪唑洗脱的 ,洗脱前有没有优化过它的浓度?
未完成
2楼2014-11-26 11:58:59
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zzlei

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 灰血动物 at 2014-11-26 11:58:59
请问是不是用咪唑洗脱的 ,洗脱前有没有优化过它的浓度?

嗯,用咪唑洗的,浓度优化好的,但是杂蛋白分不开,跑胶如图。
蛋白表达
MediaLib_Camera Roll_WP_20141124_001.jpg

3楼2014-11-26 16:45:46
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hajierlove

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
楼主,你好,最近也在做这方面的,想咨询一下,你是直接去上清过柱子纯化吗?沉淀用PBS溶解,破碎,离心取上清可以过柱子吗?
踏实
4楼2014-11-27 11:52:39
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zzlei

金虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by hajierlove at 2014-11-27 11:52:39
楼主,你好,最近也在做这方面的,想咨询一下,你是直接去上清过柱子纯化吗?沉淀用PBS溶解,破碎,离心取上清可以过柱子吗?

溶解,破碎,离心,取上清液过柱子。我做的水溶性蛋白
5楼2014-11-27 12:00:50
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