24小时热门版块排行榜    

查看: 602  |  回复: 4
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

zzlei

金虫 (小有名气)

[求助] 蛋白表达 已有2人参与

BL21菌株,0.4mM IPTG, 30度诱导五个小时,水溶性蛋白,表达量还算高,但过完镍柱洗脱跑电泳时,发现杂蛋白也很多。本以为是洗脱的问题,但尝试了好多次还是洗不干净。是不是表达出了问题?应该怎么改进? 希望各位支招
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hajierlove

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
楼主,你好,最近也在做这方面的,想咨询一下,你是直接去上清过柱子纯化吗?沉淀用PBS溶解,破碎,离心取上清可以过柱子吗?
踏实
4楼2014-11-27 11:52:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 5 个回答

灰血动物

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
请问是不是用咪唑洗脱的 ,洗脱前有没有优化过它的浓度?
未完成
2楼2014-11-26 11:58:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zzlei

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 灰血动物 at 2014-11-26 11:58:59
请问是不是用咪唑洗脱的 ,洗脱前有没有优化过它的浓度?

嗯,用咪唑洗的,浓度优化好的,但是杂蛋白分不开,跑胶如图。
蛋白表达
MediaLib_Camera Roll_WP_20141124_001.jpg

3楼2014-11-26 16:45:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zzlei

金虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by hajierlove at 2014-11-27 11:52:39
楼主,你好,最近也在做这方面的,想咨询一下,你是直接去上清过柱子纯化吗?沉淀用PBS溶解,破碎,离心取上清可以过柱子吗?

溶解,破碎,离心,取上清液过柱子。我做的水溶性蛋白
5楼2014-11-27 12:00:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 确定了,国自然21号放榜 +4 布布和一二 2026-08-10 4/200 2026-08-10 17:48 by ZJTJZ
[基金申请] 静等基金结果 +5 gjjjzhong 2026-08-10 16/800 2026-08-10 17:19 by Tide man
[基金申请] 我的国基提前知道中了,可是同事的操作让我实在接受不了,怎么会有这样的人 +8 家与远方 2026-08-10 11/550 2026-08-10 17:09 by 六两废铜
[基金申请] FileCode能看出啥? +4 要乐观耀哥 2026-08-10 8/400 2026-08-10 15:02 by 天神眷顾
[基金申请] 应该是93bebmhtak前后十一个字符比较关键 +14 Lanmanbaby 2026-08-09 22/1100 2026-08-10 14:57 by wwncly
[基金申请] 好奇怪的filecode +4 布布和一二 2026-08-08 5/250 2026-08-10 14:20 by 冰心玉壶晴
[基金申请] 综述论文作为代表作会不会影响评审专家的印象分? +10 yufeiwaner 2026-08-09 10/500 2026-08-10 13:44 by cdutwml
[基金申请] 关于代码变化问题,想知道的进来 +16 且听虎啸 2026-08-07 23/1150 2026-08-10 12:35 by majunge000
[基金申请] 这样的filecode谁见过 +11 布布和一二 2026-08-08 22/1100 2026-08-10 11:10 by wmfsnow
[基金申请] 面上项目filecode邪修 +5 西山十月 2026-08-09 7/350 2026-08-10 07:32 by 仁砚薪传
[基金申请] fileCode有新解读? +10 Tide man 2026-08-08 18/900 2026-08-09 12:55 by 仁砚薪传
[基金申请] 关于filecode,很负责任的告诉大家 +6 爱看书的可乐 2026-08-08 7/350 2026-08-08 22:13 by a_niu
[基金申请] 关于豆爷回答的JTJC与%2F数量 +5 yang182083 2026-08-06 7/350 2026-08-08 18:29 by zhanghaozhu
[基金申请] 国基金的申报应该改成非等额制,评价高的钱多评价低的钱少,但是增加资助率 +7 a089 2026-08-07 7/350 2026-08-08 18:05 by gltch
[基金申请] filecode +14 等待解的谜 2026-08-06 19/950 2026-08-07 12:20 by wlwhappy
[基金申请] 求各位大神看下 100+6 hpkpkpkp 2026-08-05 33/1650 2026-08-06 14:49 by zhiyanjiang
[基金申请] 影响面上的因素 +8 布布和一二 2026-08-05 11/550 2026-08-06 10:41 by 宝贝虫子
[基金申请] 好消息?这个有何含义??? +8 Tide man 2026-08-05 10/500 2026-08-05 16:14 by xmuxiaoyu
[基金申请] 有没有H口的?有收到消息的吗? +3 超级海虾 2026-08-04 3/150 2026-08-04 17:26 by 学教育滴
[基金申请] 纯娱乐,不喜欢勿喷 +7 Tide man 2026-08-04 10/500 2026-08-04 15:10 by loufangrui
信息提示
请填处理意见