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xlx906047684金虫 (著名写手)
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[求助]
引物设计 已有7人参与
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| 导师按照文献给我设计了两对引物，但PCR的结果和文献完全不一样，文献上得到的是1100bp左右的条带，我得到得的是300bp左右的条带，而且提DNA和PCR都重复做了，结果一样，导师说要重新设计引物，但我不知道怎么在NCBI上找到该物种中发现的所有这个基因相关序列，也不知道该怎么设计引物，本人是跨专业做分子，所以好多东西还不太懂，希望大家能帮帮忙 |
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xlx906047684
金虫 (著名写手)
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1 gaaaacccat tcgatcgatc attagtactt ccaactaaac tagcaagcta gtgagagatg 61 gcagcttcaa ctgaagagat gacgaaggca ctaacagccg ccaccgtcct ggccatcggc 121 acggccaatc ctcccaattg ctactaccaa gctgactttc ccgacttcta cttccgcgcc 181 accaacagcg accacctcac ccacctcaag cacaaattca agcgcatttg tgagaagtca 241 atgatcgaga agcgttacct tcaattgacg gaagacattc tcaaagaaaa cccgaatatc 301 ggtgcgtacg aggcaccatc attggatgta agacacgaaa ttcaagtgaa aggagttgca 361 cagcttggga aagaggccgc tctcaaggcc atgcaagagt ggggccaacc caaatctaag 421 atcacacatc tcatcgtgtg ttgcatagcc ggggttgaca tgccaggcgc agattatcaa 481 ctcactaagc ttcttgacct aaactcttct gttaagcgct tcatgtttta ccacctagga 541 tgttacgctg gtggcaccgt ccttcgtctt gccaaggata tagccgagaa caacaaagga 601 gctcgtgttc tcatagtttg ttcagagatg acgccaatct gcttccgtgg gccatctgaa 661 acccatatag actccatggt agggcaagca atatttggtg atggtgctgc agctgtcata 721 gttggagcga acccagacct aacagttgag aagcccattt tcgagttgat ttccacagcc 781 caaactatca tacctgaatc tgatggtgcg attgagggcc atttgctaga agttggactc 841 agtttccaac tctaccagaa tgtccccgca ctaatctcta atagcatagg aacatgcctt 901 tcagaagctt tcacccctct aaacattagc aattggaact ccctcttctg gatcgcacat 961 cctggtggcc ctgctatcct agaccatgtt gaggccaccg ttggtctcaa caaggagaaa 1021 cttaaggcaa ccagacaagt gctgaacgac tatggaaaca tgtcaagtgc ttgtgtgttt 1081 tttatcatgg atgagatgag gaagaagtca cttgaaaacg gccacgcaac gactggagaa 1141 ggactgcagt ggggcgttct gtttggattc gggcctggta ttactgttga aactgtggtg 1201 ctacgaagtg tgcccatcat ttaactcaaa atgattgaat cacgtacttc caattagtaa 1261 tatatgttca tccttctgta tcggtagagt tgatctgatg tctttgtgtt ttctttatta 1321 ttgagccctt ttgatcatgt accctgaata attgtgagtt tcctccacaa tgggaacgct 1381 tgtatgatag cattttcaat ttaaagaata acattatatt cgatctcc 其中57bp到1224bp为编码区，导师给我设计了两对引物 第一对 F:atggcagcttcaactgaag R:ttaaatgatgggcacacttc 第二对 F:gatggcagcttcaactgaag R:atgatgggcacacttcgtag 第一对引物和文献上的一样，但扩增结果和文献上完全不一样，只是没加文献上的酶切位点和保护碱基，文献上得到的是1137bp，我得到的亮带是300bp左右 ，而且第二对引物和第一对得到的结果完全不一样，其实两对引物差别也不大，就第二对引物得前引物在5端加了一个g,后引物往编码区内移了4个bp,所以感觉好奇怪，老师说要重新设计引物，怎么设计啊， |
9楼2014-11-25 20:51:14
zhenxiangkai
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2楼2014-11-25 08:30:50
3楼2014-11-25 09:57:59
4楼2014-11-25 09:59:43