[交流] pET 28α在DH5α中摇菌18个小时，菌浓度低，质粒得量低是怎么个情况啊？ 已有12人参与

菌种是去年3月份的，昨天分装成小份约100μl的，并且取了其中一份做平板划线，划了5个，平板含千分之一的卡那霉素，加入抗生素时培养基温度大概在55-60之间吧。 37度，30转倒置培养过夜（摇床设置键失灵了。。。），不知道什么时候温度降下来了，早上去看的时候有很小的单菌落，非常非常小，能看到，但没办法挑，之后又在37度培养了4个小时，才有明显的10μl枪头尖大小的单菌落，才开始挑单克隆菌。 发现总体的菌落不多，之字划线5边，就第二边开始的地方有单菌落，之后都没有。 5个板挑了10个单菌落进行培养，培养条件如下 50ml离心管中加10ml LB液体培养基加10μl卡那霉素，混匀后开始用10μl灭菌过的枪头挑单菌落，枪头沾到菌落后就丢入到50ml离心管中。 封口膜封好，37度200rpm摇菌18小时，用96酶标板测得OD600为1.609 2ml菌提取的质粒只有1.8μg左右 求助怎么让菌浓度升高？ 能用氯霉素促使质粒拷贝增加么？具体怎么操作？ 另附今天质粒电泳图 marker是250-15000的，倒数第三条是2500，质粒条带位置基本正确。上样8μl。。。质粒量实在是低啊。。。。。。 20141119-1质粒_看图王.jpg 感谢大家对我帖子的回复和建议 目前实验条件是这样的，我从别的地方要来的甘油菌，要活化菌种，小摇18个小时菌OD才1.6左右，要求OD达到2.0以上，同时，要求2ml 菌质粒得量大于10μg，但现在质粒得量很低，我并没有做转化和重组，只是想单纯的把菌体数量提上去并提高质粒得量。谢谢大家！ [ Last edited by BCK920314 on 2014-11-21 at 19:35 ]

回复此楼