| 查看: 8844 | 回复: 22 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
[交流]
pET 28α在DH5α中摇菌18个小时，菌浓度低，质粒得量低是怎么个情况啊？ 已有12人参与
|
|||
|
菌种是去年3月份的，昨天分装成小份约100μl的，并且取了其中一份做平板划线，划了5个，平板含千分之一的卡那霉素，加入抗生素时培养基温度大概在55-60之间吧。 37度，30转倒置培养过夜（摇床设置键失灵了。。。），不知道什么时候温度降下来了，早上去看的时候有很小的单菌落，非常非常小，能看到，但没办法挑，之后又在37度培养了4个小时，才有明显的10μl枪头尖大小的单菌落，才开始挑单克隆菌。 发现总体的菌落不多，之字划线5边，就第二边开始的地方有单菌落，之后都没有。 5个板挑了10个单菌落进行培养，培养条件如下 50ml离心管中加10ml LB液体培养基加10μl卡那霉素，混匀后开始用10μl灭菌过的枪头挑单菌落，枪头沾到菌落后就丢入到50ml离心管中。 封口膜封好，37度200rpm摇菌18小时，用96酶标板测得OD600为1.609 2ml菌提取的质粒只有1.8μg左右 求助怎么让菌浓度升高？ 能用氯霉素促使质粒拷贝增加么？具体怎么操作？ 另附今天质粒电泳图 marker是250-15000的，倒数第三条是2500，质粒条带位置基本正确。上样8μl。。。质粒量实在是低啊。。。。。。  20141119-1质粒_看图王.jpg 感谢大家对我帖子的回复和建议 目前实验条件是这样的，我从别的地方要来的甘油菌，要活化菌种，小摇18个小时菌OD才1.6左右，要求OD达到2.0以上，同时，要求2ml 菌质粒得量大于10μg，但现在质粒得量很低，我并没有做转化和重组，只是想单纯的把菌体数量提上去并提高质粒得量。谢谢大家！ [ Last edited by BCK920314 on 2014-11-21 at 19:35 ] |
回复此楼» 猜你喜欢
湖北师范大学招调剂啦
已经有9人回复
-
邵阳学院食品与化学工程学院硕士调剂
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有65人回复
-
天津商业大学 生物与医药课题组招生
已经有0人回复
-
生物化工学硕招收调剂
已经有0人回复
-
广东石油化工学院2026年硕士研究生需要多名生物，制药工程，食品专业的调剂生
已经有0人回复
-
化工申博
已经有3人回复
-
申博自荐
已经有2人回复
-
广西民族大学化学化工学院化学工程与技术学硕，材料化工专硕调剂名额充足！
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 转化感受态后提取质粒，测浓度总是很低
已经有17人回复
3楼2014-11-20 08:15:20
喜气洋洋
金虫 (初入文坛)
- 应助: 7 (幼儿园)
- 金币: 1953.1
- 散金: 70
- 帖子: 44
- 在线: 163.3小时
- 虫号: 2597178
- 注册: 2013-08-14
- 性别: GG
- 专业: 生物防治
2楼2014-11-19 23:06:59
winterb
铁杆木虫 (小有名气)
- 应助: 21 (小学生)
- 金币: 6877.6
- 帖子: 65
- 在线: 665.6小时
- 虫号: 2045130
- 注册: 2012-10-06
- 性别: GG
- 专业: 蛋白质组学
4楼2014-11-20 08:45:41
hikers86
木虫 (正式写手)
- 应助: 9 (幼儿园)
- 金币: 2253.9
- 散金: 1305
- 红花: 1
- 帖子: 701
- 在线: 159.9小时
- 虫号: 1114918
- 注册: 2010-10-06
- 性别: GG
- 专业: 药剂学
5楼2014-11-20 09:18:49
