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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白电泳/WB » western抗体是怎么识别蛋白一级序列的
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muyuchc

木虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by youlinglyw at 2014-11-20 11:17:09
抗体本身就是i一级序列制备，所以跟一级序列匹配。至于识别过程，蛋白质互作。实质上是匹配抗原表位与抗体超变区中抗原结合点之间的结合。由于两者在化学结构和空间构型上呈互补关系，所以可以识别...

刚学习这些知识了解的还不是很多。抗体本身就是一级序列制备，那请问，那识别高级结构的抗体是怎么制备出来的？与识别一级序列的抗体制备有什么差别？谢谢。
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11楼2014-11-20 11:26:02
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adzzq2011

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
除了线性表位的抗体，还有空间表位抗体，这需要一些氨基酸形成特定的空间结构，刺激B细胞，分泌识别特定空间结构的抗体。这种抗体单独设计难度很高，一般都是通过用蛋白，细胞裂解液等免疫制备，再通过WB,IHC,ICC等层层刷选得到的。
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搞科研的
12楼2014-11-20 12:54:31
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liuderong

铁杆木虫 (正式写手)
引用回帖:
10楼: Originally posted by muyuchc at 2014-11-20 11:19:51
识别的一级序列即一小段肽段，其也是有个三维结构的，这种结构特异性高，制作的识别这段肽段的抗体特异性就相对较高，是吧？谢谢你，学习了。...

照你的理解也是可以的。肽段的确是有特定的三维结构的。
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13楼2014-11-20 14:27:32
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biotech_zhou

木虫 (著名写手)

待人以诚：专业/专注/专心

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
muyuchc: 金币+10, ★有帮助 2014-11-23 08:54:01
抗体的三维空间结构和线性抗原表位通过微调相互作用匹配。
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14楼2014-11-21 16:27:24
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limichuan

金虫 (正式写手)

免疫学实验超人qq：858200882

【答案】应助回帖

商家已经主动声明此回帖可能含有宣传内容
引用回帖:
4楼: Originally posted by youlinglyw at 2014-11-19 10:42:55
大多数情况下，抗体的制备是通过一级序列去制备的。

简单的回顾下抗体的制备方法
1构建表达载体
2原核表达
3纯化蛋白
4免疫动物制备抗体

发现没，经过1,2,3步骤，这是原核表达步骤，原核表达的蛋白
1没有 ...

兄台讨论一个，问题你说的抗体制备的方式基本正确，但是我认为缺少了一点，就是经过原核表达的包涵体并不是经过简单处理就去免疫的，应该还会经过蛋白复性步骤。使之重新具有原来活性结构。
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本公司专业从事蛋白纯化，抗体制备等免疫实验技术服务。欢迎咨询qq：858200882
15楼2014-11-21 21:06:24
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youlinglyw

荣誉版主 (著名写手)

一匡天下

优秀版主
引用回帖:
15楼: Originally posted by limichuan at 2014-11-21 21:06:24
兄台讨论一个，问题你说的抗体制备的方式基本正确，但是我认为缺少了一点，就是经过原核表达的包涵体并不是经过简单处理就去免疫的，应该还会经过蛋白复性步骤。使之重新具有原来活性结构。...

蛋白折叠需要专门的酶，还需要复杂的空间结构和环境体系，in vitro基本上是不可能的
而且，大部分的western blot都是sds-page，sds处理后，根本都是酶活性的一堆多肽。

一般都是几个抗原决定簇来契合抗体的肽段。
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天行健
16楼2014-11-21 22:37:38
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200923240134

禁虫 (著名写手)
本帖内容被屏蔽
17楼2014-11-22 13:47:36
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limichuan

金虫 (正式写手)

免疫学实验超人qq：858200882

【答案】应助回帖

引用回帖:
16楼: Originally posted by youlinglyw at 2014-11-21 22:37:38
蛋白折叠需要专门的酶，还需要复杂的空间结构和环境体系，in vitro基本上是不可能的
而且，大部分的western blot都是sds-page，sds处理后，根本都是酶活性的一堆多肽。

一般都是几个抗原决定簇来契合抗体的肽段 ...

兄台的讨论让人费解，我的补充是在兄台回答别问的问题的基础上的。觉得兄台回答别人的问题不够全面而已。
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本公司专业从事蛋白纯化，抗体制备等免疫实验技术服务。欢迎咨询qq：858200882
18楼2014-11-22 16:54:36
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