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western抗体是怎么识别蛋白一级序列的 已有7人参与
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| 有的western抗体是识别蛋白一级序列的，请问是怎么特异性识别的？ |
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两块石头
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【答案】应助回帖
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muyuchc: 金币+10 2014-11-20 19:17:01
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muyuchc: 金币+10 2014-11-20 19:17:01
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大多数情况下，抗体的制备是通过一级序列去制备的。 简单的回顾下抗体的制备方法 1构建表达载体 2原核表达 3纯化蛋白 4免疫动物制备抗体 发现没，经过1,2,3步骤，这是原核表达步骤，原核表达的蛋白 1没有活性， 2多肽为主。 因为原核表达的蛋白 1缺乏真核表达所需要的酶，所以无法正确折叠成蛋白 2缺乏真核表达所需要的内环境，细胞器等 3原核表达以包涵体表达为主，所以，经过那么强烈的ph变化和尿素处理最后纯化出来的蛋白，有活性才怪，基本上就是条肽链 那么，以上问题解决了，答案就很明显了，你用的一级序列去制备抗体，那么抗体能够识别的， 自然是一级序列了 然后问题来了，这种情况下，事实上，抗体是不特异的。所以，极少见那些可以用自己制备抗体做出非常单一漂亮的wb图片的 所以，如何解决？单克隆抗体嘿嘿，牛一点咋办，直接从生物里提取活的抗体，那样最有用，生化危机啦，猿星崛起啦，都是这么干的。 |
4楼2014-11-19 10:42:55
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