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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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蓝索道人

木虫 (正式写手)

[求助] GC-rich and repeated DNA 已有1人参与

各位，最近想扩增一段DNA（全长3800bp平均GC含量73%，部分重复区域（3000bp）达到80%以上），大体思路如下：
提取总RNA-反转录-PCR或者提基因组-PCR（两种方法都试过）
用的是全式金的Fasrpfu、hifi酶
调整过温度（55-65）、试过加GC enhancer或stimulate、MgSO4;更换过不同组织的细胞提取基因组；尝试过更换引物
但扩增出来的不是目的序列，目前陷入瓶颈
在此向各位请教，有什么建议啊，是不是要换个酶，还是引物特异性不好，还是反转录没做好？
真心要崩溃了啊
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努力就有收获！
1楼 2014-11-10 15:58:54
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cainiao9405

金虫 (正式写手)
楼主，请问您的问题解决了吗？我也遇到了同样的问题。
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4楼2015-07-06 09:32:31
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去哪里看海

铁虫 (小有名气)
好像是看见宝生物家有高GC含量的PCR BUFFER和其他配套试剂，不知道卤煮有没有试过？
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2014-11-10 16:42:55
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koujie1986

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
蓝索道人(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-11-10 22:11:11
蓝索道人: 金币+1, ★有帮助, 因为实验室酶有限的2、3种，buffer也有限，所以要多收集一下做过的经验，好去买酶之类的 2014-11-11 08:26:36
可以考虑用GC buffer试一下
赞一下 回复此楼
3楼2014-11-10 17:00:55
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