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蓝索道人

木虫 (正式写手)

[求助] GC-rich and repeated DNA 已有1人参与

各位,最近想扩增一段DNA(全长3800bp平均GC含量73%,部分重复区域(3000bp)达到80%以上),大体思路如下:
提取总RNA-反转录-PCR或者提基因组-PCR(两种方法都试过)
用的是全式金的Fasrpfu、hifi酶
调整过温度(55-65)、试过加GC enhancer或stimulate、MgSO4;更换过不同组织的细胞提取基因组;尝试过更换引物
但扩增出来的不是目的序列,目前陷入瓶颈
在此向各位请教,有什么建议啊,是不是要换个酶,还是引物特异性不好,还是反转录没做好?
真心要崩溃了啊
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努力就有收获!
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koujie1986

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
蓝索道人(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-11-10 22:11:11
蓝索道人: 金币+1, ★有帮助, 因为实验室酶有限的2、3种,buffer也有限,所以要多收集一下做过的经验,好去买酶之类的 2014-11-11 08:26:36
可以考虑用GC buffer试一下
3楼2014-11-10 17:00:55
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去哪里看海

铁虫 (小有名气)

好像是看见宝生物家有高GC含量的PCR BUFFER和其他配套试剂,不知道卤煮有没有试过?
2楼2014-11-10 16:42:55
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cainiao9405

金虫 (正式写手)

楼主,请问您的问题解决了吗?我也遇到了同样的问题。
4楼2015-07-06 09:32:31
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