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丁丁丁叮

新虫 (初入文坛)

[求助] 有一道生化题,求高手帮助!!!! 已有7人参与

有人从胰岛B细胞中得到胰岛素的mRNA,然后通过逆转录得到了它的cDNA。随后再将胰岛素cDNA插入到原核细胞表达载体。然而,当将上述重组载体成功转化到大肠杆菌之后,始终得不到有活性的胰岛素,为什么?如何解决他的问题?

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062200754

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
因为大肠杆菌没有加工修饰多肽链成为胰岛素的酶。

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» 本帖已获得的红花(最新10朵)

2楼2014-11-06 23:15:59
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haiven

捐助贵宾 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
引用回帖:
4楼: Originally posted by 丁丁丁叮 at 2014-11-07 08:01:07
如何解决他的问题呢?
...

1、看插入到大肠杆菌的ORF是否移码;2、必须用真核表达系统才会产生有活性的胰岛素,比如酵母,昆虫细胞系等。
走进你,温暖我,迷失于这个世界!
5楼2014-11-07 09:22:54
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cjl123456

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
要得到有活性的胰岛素,必须要有内质网,高尔基体的进一步加工修饰,将得到的胰岛素原激活,但在原核的大肠杆菌中无法完成
没有做不到的,只有想不到的
6楼2014-11-07 23:58:20
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ccqqsunshine

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
1有无内含子
2有无缺少的tRNA
3需要加工吗,如二硫键

[ 发自小木虫客户端 ]
8楼2014-11-08 12:44:29
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小小技术官

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
胰岛素是不是有一个前体,在mRNA翻译为蛋白后是没有活性的,如果要激活还需要其他的蛋白酶切一下。
生活是一面镜子,要笑着面对!
9楼2014-11-09 15:10:10
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普通回帖

duanjifu520

铜虫 (正式写手)

楼上正解!!!

[ 发自小木虫客户端 ]
3楼2014-11-07 06:19:56
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丁丁丁叮

新虫 (初入文坛)

送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by 062200754 at 2014-11-06 23:15:59
因为大肠杆菌没有加工修饰多肽链成为胰岛素的酶。

如何解决他的问题呢?

[ 发自小木虫客户端 ]
4楼2014-11-07 08:01:07
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caitlin0626

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
胰岛素上有二硫键,即使表达出来也无法得到有活性的蛋白质。

[ 发自小木虫客户端 ]
7楼2014-11-08 12:19:20
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迭芳芳儿

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

应该8M尿素溶解包涵体变性后再缓慢复性
10楼2017-04-29 14:31:08
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