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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 有一道生化题，求高手帮助！！！！
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丁丁丁叮

新虫 (初入文坛)

[求助] 有一道生化题，求高手帮助！！！！ 已有7人参与

有人从胰岛B细胞中得到胰岛素的mRNA，然后通过逆转录得到了它的cDNA。随后再将胰岛素cDNA插入到原核细胞表达载体。然而，当将上述重组载体成功转化到大肠杆菌之后，始终得不到有活性的胰岛素，为什么？如何解决他的问题？

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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1楼 2014-11-06 21:38:48
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

062200754

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
因为大肠杆菌没有加工修饰多肽链成为胰岛素的酶。

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丁丁丁叮
2楼2014-11-06 23:15:59
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haiven

捐助贵宾 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
引用回帖:
4楼: Originally posted by 丁丁丁叮 at 2014-11-07 08:01:07
如何解决他的问题呢？
...

1、看插入到大肠杆菌的ORF是否移码；2、必须用真核表达系统才会产生有活性的胰岛素，比如酵母，昆虫细胞系等。
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走进你，温暖我，迷失于这个世界！
5楼2014-11-07 09:22:54
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cjl123456

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
要得到有活性的胰岛素，必须要有内质网，高尔基体的进一步加工修饰，将得到的胰岛素原激活，但在原核的大肠杆菌中无法完成
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没有做不到的，只有想不到的
6楼2014-11-07 23:58:20
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ccqqsunshine

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

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1有无内含子
2有无缺少的tRNA
3需要加工吗，如二硫键

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8楼2014-11-08 12:44:29
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小小技术官

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
胰岛素是不是有一个前体，在mRNA翻译为蛋白后是没有活性的，如果要激活还需要其他的蛋白酶切一下。
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生活是一面镜子，要笑着面对！
9楼2014-11-09 15:10:10
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普通回帖

duanjifu520

铜虫 (正式写手)
楼上正解！！！

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3楼2014-11-07 06:19:56
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丁丁丁叮

新虫 (初入文坛)
送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by 062200754 at 2014-11-06 23:15:59
因为大肠杆菌没有加工修饰多肽链成为胰岛素的酶。

如何解决他的问题呢？

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4楼2014-11-07 08:01:07
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caitlin0626

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
胰岛素上有二硫键，即使表达出来也无法得到有活性的蛋白质。

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7楼2014-11-08 12:19:20
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迭芳芳儿

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

应该8M尿素溶解包涵体变性后再缓慢复性
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10楼2017-04-29 14:31:08
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