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youzhi-l

新虫 (初入文坛)

[求助] 烟草基因组PCR 已有1人参与

做转基因烟草鉴定工作,最近新设计了引物,生工合成引物回来的理论退火温度为50度,用TAKARA的酶一直都P不出来条带,使用全世金的supermix引物做PCR之后到60°的退火温度时才能出来比较单一的条带,条带大小在目的基因大小处,跟导师商量之后说退火温度太高了不合适,但是降低温度的话会有很多的非特异条带,所以想问下哪位大神可以提供一些建议?图中使用梯度PCR,温度从48度到60度

烟草基因组PCR
捕获.PNG
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Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

你这个也就是引物设计问题,自己设计一条不就好了

[ 发自小木虫客户端 ]
2楼2014-11-05 23:22:56
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free_zi

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

烟草基因的扩增有难度,建议选择pfx高保真酶,添加DMSO,可以增加特异性。可以尝试一下。
3楼2015-05-21 13:35:22
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