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NSDSKY_LZM

金虫 (小有名气)

[求助] cdna-aflp 已有2人参与

请问大家用cDNA-aflp法，跑聚丙烯酰胺凝胶用的什么电泳槽啊？多大的胶板？
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1楼 2014-11-02 19:59:11
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dongdekun

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
NSDSKY_LZM(西门吹雪170代发): 金币+3, 鼓励回帖交流 2014-11-05 14:20:41
1）AFLP用测序胶电泳槽，尿素变性聚丙烯酰胺凝胶电泳（Ura-PAGE）。下面是我们用的电泳槽技术参数：
玻璃面积（W×L）：380×320（mm）
凝胶面积（W×L）：350×300（mm）
凝胶厚度：0.4（mm）
样品通量：（0.4mm厚）68鲨鱼齿；（0.4mm厚）100鲨鱼齿（选配）
缓冲液容积：～1500（ml）
外形尺寸（L×W×H）：406×176×400（mm）

2）一般Ura-Page的时候，我是不放Marker的；找到差异后，回收条带，PCR扩增，再用琼脂糖电泳，点Maker看大小，或者直接测序。普通Marker变性也可以用于参考，但经验表明不是非常准确。

3）cDNA-AFLP，假阳性非常非常高，有条件建议使用更先进的技术，有money直接交给公司来做。
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3楼2014-11-03 12:39:25
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NSDSKY_LZM

金虫 (小有名气)
还有就是用的MAKER是什么？
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2楼2014-11-02 20:27:51
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NSDSKY_LZM

金虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by dongdekun at 2014-11-03 12:39:25
1）AFLP用测序胶电泳槽，尿素变性聚丙烯酰胺凝胶电泳（Ura-PAGE）。下面是我们用的电泳槽技术参数：
玻璃面积（W×L）：380×320（mm）
凝胶面积（W×L）：350×300（mm）
凝胶厚度：0.4（mm）
样品通量：（0.4 ...

你的loading buffer 是买的吗？什么公司的？

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4楼2014-11-03 14:00:20
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dongdekun

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by NSDSKY_LZM at 2014-11-03 14:00:20
你的loading buffer 是买的吗？什么公司的？
...

PCR 产物与甲酰胺上样缓冲液（ 98%甲酰胺， 10 m mol‚L-1 EDTA， 0.025%溴酚兰， 0.025%二甲苯青 FF） 1:1 混合， 95°C 变性 5 min，然后迅速置冰上至冷却-20℃保存备用。
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5楼2014-11-03 22:56:53
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