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NSDSKY_LZM

金虫 (小有名气)

[求助] cdna-aflp 已有2人参与

请问大家用cDNA-aflp法,跑聚丙烯酰胺凝胶用的什么电泳槽啊?多大的胶板?
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dongdekun

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
NSDSKY_LZM(西门吹雪170代发): 金币+3, 鼓励回帖交流 2014-11-05 14:20:41
1)AFLP用测序胶电泳槽,尿素变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(Ura-PAGE)。下面是我们用的电泳槽技术参数:
玻璃面积(W×L):380×320(mm)
凝胶面积(W×L):350×300(mm)
凝胶厚度:0.4(mm)
样品通量:(0.4mm厚)68鲨鱼齿;(0.4mm厚)100鲨鱼齿(选配)
缓冲液容积:~1500(ml)
外形尺寸(L×W×H):406×176×400(mm)

2)一般Ura-Page的时候,我是不放Marker的;找到差异后,回收条带,PCR扩增,再用琼脂糖电泳,点Maker看大小,或者直接测序。普通Marker变性也可以用于参考,但经验表明不是非常准确。

3)cDNA-AFLP,假阳性非常非常高,有条件建议使用更先进的技术,有money直接交给公司来做。
3楼2014-11-03 12:39:25
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小松果2012

银虫 (正式写手)

西门吹雪170: 应助指数-1, 无应助 2014-11-26 10:12:28
最近正开始做这个,还在摸索中……
10楼2014-11-07 23:44:56
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普通回帖

NSDSKY_LZM

金虫 (小有名气)

还有就是用的MAKER是什么?
2楼2014-11-02 20:27:51
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NSDSKY_LZM

金虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by dongdekun at 2014-11-03 12:39:25
1)AFLP用测序胶电泳槽,尿素变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(Ura-PAGE)。下面是我们用的电泳槽技术参数:
玻璃面积(W×L):380×320(mm)
凝胶面积(W×L):350×300(mm)
凝胶厚度:0.4(mm)
样品通量:(0.4 ...

你的loading buffer 是买的吗?什么公司的?

[ 发自小木虫客户端 ]
4楼2014-11-03 14:00:20
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dongdekun

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by NSDSKY_LZM at 2014-11-03 14:00:20
你的loading buffer 是买的吗?什么公司的?
...

PCR 产物与甲酰胺上样缓冲液( 98%甲酰胺, 10 m mol‚L-1 EDTA, 0.025%溴酚兰, 0.025%二甲苯青 FF) 1:1 混合, 95°C 变性 5 min,然后迅速置冰上至冷却-20℃保存备用。
5楼2014-11-03 22:56:53
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NSDSKY_LZM

金虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by dongdekun at 2014-11-03 12:39:25
1)AFLP用测序胶电泳槽,尿素变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(Ura-PAGE)。下面是我们用的电泳槽技术参数:
玻璃面积(W×L):380×320(mm)
凝胶面积(W×L):350×300(mm)
凝胶厚度:0.4(mm)
样品通量:(0.4 ...

你们用的电泳槽叫什么名字?

[ 发自小木虫客户端 ]
6楼2014-11-05 12:26:53
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dongdekun

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
6楼: Originally posted by NSDSKY_LZM at 2014-11-05 12:26:53
你们用的电泳槽叫什么名字?
...

测序胶电泳槽,北京六一、君意东方都有。这不算帮他们广告吧:-)
7楼2014-11-05 12:35:07
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NSDSKY_LZM

金虫 (小有名气)

引用回帖:
7楼: Originally posted by dongdekun at 2014-11-05 12:35:07
测序胶电泳槽,北京六一、君意东方都有。这不算帮他们广告吧:-)...

你现在在做这方面的实验吗?
8楼2014-11-05 18:31:26
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dongdekun

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
8楼: Originally posted by NSDSKY_LZM at 2014-11-05 18:31:26
你现在在做这方面的实验吗?...

dDNA-AFLP是7、8年前的事情了。。。
9楼2014-11-06 09:20:12
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