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neer

铁虫 (初入文坛)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 14.5
散金: 20
红花: 1
帖子: 38
在线: 52小时
虫号: 667757
注册: 2008-12-04
性别: GG
专业: 微生物遗传育种学

[求助] 易错PCR酶切与连接已有8人参与

做了大半年的易错PCR，但酶切连接后转化子很少，求助！！！
我的基因为2700bp，质粒为pET-28（a），酶切位点为BamH I与Xhol，FD、NEB的内切酶都试过，效果都不好，请各位大侠赐教。

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His标签蛋白纯化怎么才能快？已经有0人回复

1楼 2014-10-30 16:29:15

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

hihe99

银虫 (小有名气)

应助: 4 (幼儿园)
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帖子: 133
在线: 84.6小时
虫号: 1464738
注册: 2011-10-28
性别: GG
专业: 生物化学

话说clontech有个in-fusion cloning 的试剂盒，不用考虑酶切位点，但是好像有点贵。不过我正在尝试一篇文章上的类似方法，正在做pcr验证。。。希望可以有效啊啊啊~~~

ps: 文章题目One-step sequence- and ligation-independent cloning (SLIC): Rapid and versatile cloning method for functional genomics studies，Jae-Yeon Jeong etal，文章的Supplementary Protocol就是方法