24小时热门版块排行榜    

查看: 2902  |  回复: 23
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

neer

铁虫 (初入文坛)

[求助] 易错PCR酶切与连接 已有8人参与

做了大半年的易错PCR,但酶切连接后转化子很少,求助!!!
我的基因为2700bp,质粒为pET-28(a),酶切位点为BamH I与Xhol,FD、NEB的内切酶都试过,效果都不好,请各位大侠赐教。
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

shiqili471

金虫 (小有名气)

引用回帖:
14楼: Originally posted by huangrui1988 at 2014-11-02 23:39:17
是的,我知道这个很难相信。应该这么说,他不是帮你突变,是帮你把结构弄得乱七八糟。最后让你不好切。...

受教了
16楼2014-11-03 11:03:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 24 个回答

jian212

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,分子生物期待你更多精彩。 2014-10-31 13:23:22
首尾两端多加几个保护碱基试试。。
学习再学习,努力再努力。
2楼2014-10-31 10:42:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

huangrui1988

铜虫 (小有名气)


【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,分子生物期待你更多精彩。 2014-10-31 13:23:31
突变的起始区域选在你的酶切位点的前后100bp。
3楼2014-10-31 10:55:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

厚德求是

木虫 (著名写手)

Ph. D. Prof.

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流! 2014-10-31 23:12:39
你说的转化子少,不是没有,所以我想是不是感受态的问题啊,重制感受态试试看,用商品化的感受态制备试剂盒,自己做的毕竟难保证好还是不好。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
4楼2014-10-31 13:45:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 估计是周四 +3 archvillain 2026-08-18 3/150 2026-08-21 01:48 by jnhyjjm
[基金申请] 科研孤儿太难了 +14 我4大白菜 2026-08-20 15/750 2026-08-20 22:33 by 袁向阳007
[基金申请] 时间戳又变了 +12 wuchongjun 2026-08-20 17/850 2026-08-20 20:05 by spzhao
[基金申请] 时间戳变了,能看出什么问题? +18 基诺咪客 2026-08-17 23/1150 2026-08-20 17:19 by Godzela
[基金申请] 只有每年这种时候来逛逛小木虫 +21 yaoyewhu2008 2026-08-20 22/1100 2026-08-20 17:03 by yaoyewhu2008
[基金申请] 重要消息,中午系统在维护 +11 yuleib84 2026-08-18 12/600 2026-08-20 11:09 by xskun
[基金申请] 今天基金会出结果吗?20260819 +14 kkkl_v 2026-08-19 15/750 2026-08-20 08:21 by sunzitan
[教师之家] 为什么余额宝的年化利率越来越低?主要原因有哪些? +5 瞬息宇宙 2026-08-15 5/250 2026-08-19 20:23 by super2002521
[基金申请] 今天放榜吗? +14 布布和一二 2026-08-19 15/750 2026-08-19 18:07 by gltch
[基金申请] filecode=后面第一个是大写字母 +10 wangze12014 2026-08-14 12/600 2026-08-19 16:56 by 苦难博士
[基金申请] 朋友圈看到的 +6 wangzilk 2026-08-18 8/400 2026-08-19 10:55 by Haru815
[基金申请] 快农历七夕节了,轻松一下,男人悄悄话,女施主请不要进来。 +6 Tide man 2026-08-14 7/350 2026-08-19 09:56 by ZJTJZ
[基金申请] 什么时候开奖? +6 CrisMessi 2026-08-18 6/300 2026-08-19 08:06 by Equinoxhua
[基金申请] 明天放榜? +5 Shxjjxjkx 2026-08-18 5/250 2026-08-18 18:14 by -大大大大大-
[论文投稿] 投稿咨询 +4 wwm09 2026-08-17 6/300 2026-08-18 15:36 by wwm09
[基金申请] 时间戳又变了8-15 +14 archvillain 2026-08-15 26/1300 2026-08-18 13:37 by phantomgost
[基金申请] 今天维护系统维护 祝所有人 高中 +8 gjjjzhong 2026-08-18 9/450 2026-08-18 13:01 by 家与远方
[基金申请] 93BebMhtakh前后11位开头都是大写 +4 且听虎啸 2026-08-17 5/250 2026-08-18 00:49 by 蔡棒棒菂
[基金申请] 感觉是下周放榜了 +6 angus9576 2026-08-17 11/550 2026-08-17 23:57 by angus9576
[精细化工] 招聘 金属平磨液,抛光液研发工程师 +3 小天0311 2026-08-14 3/150 2026-08-16 07:31 by H9PLUS
信息提示
请填处理意见