24小时热门版块排行榜

返回列表

当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

neer

铁虫 (初入文坛)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 14.5
散金: 20
红花: 1
帖子: 38
在线: 52小时
虫号: 667757
注册: 2008-12-04
性别: GG
专业: 微生物遗传育种学

[求助] 易错PCR酶切与连接已有8人参与

做了大半年的易错PCR，但酶切连接后转化子很少，求助！！！
我的基因为2700bp，质粒为pET-28（a），酶切位点为BamH I与Xhol，FD、NEB的内切酶都试过，效果都不好，请各位大侠赐教。

回复此楼

» 猜你喜欢

为什么蛋白质氨基酸测定大家都测17种? 已经有5人回复
《灰分记：我与坩埚的“灰烬”之恋》已经有3人回复
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费? 已经有274人回复
求助食品检验工（基础知识），中国劳动社会出版社电子版已经有5人回复
胶体几丁质的结晶度？已经有0人回复
诚挚招收全日制博士！！！中国农业科学院麻类研究所谭志坚研究员课题组招收博士已经有2人回复
三甲基羟乙基丙二胺的合成路线已经有5人回复

1楼2014-10-30 16:29:15

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

caihang

铜虫 (小有名气)

应助: 34 (小学生)
金币: 80.3
红花: 4
帖子: 134
在线: 53小时
虫号: 3381487
注册: 2014-08-25
专业: 兽医传染病学

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1

必须要批评你，做了大半年连接，感觉你连问题的关键都没找到。
1，你确定是酶切效果不好吗？你用这两种酶分别单酶切，然后用单酶切回收的质粒做转化，看有没有长菌，有就是酶切不行。
2，xho 1这个酶切位点你查过没有。它好像是平滑连接末端，而Bamh1是粘性末端，两头的连接效率是不对等的，导致连接效率较两个粘性末端的要低很多，你可以尝试用Solution1做连接，每次多做几个，多设几个比例。
3，实在连不上，试试一步法连接试剂盒吧。