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大蛀蟲

铜虫 (初入文坛)

[求助] 关于柱层析收集液结晶的一些疑惑,望不吝赐教 已有3人参与

楼主在做洋葱中小极性分子的提取,没有目标产物,只要分得的化合物纯度高,量≥10mg就ok→▁→
前处理过后是乙醇加热浸提浓缩再然后过大孔树脂粗分了几段,现在在过硅胶柱,遇到了一些困难,那么问题来了...
①样品1g以上我会过柱,100mg左右我就跑制备板了,那么硅胶柱最小的上样量大概是多大呢?我这边最小的柱子直径是1cm左右
②有些收集液放置一晚或者更长时间,挥发掉部分溶剂后析出晶体,听师兄说只要将其过滤,拿多种溶剂冲洗就能得到纯的化合物了,结晶是因为溶剂挥发溶液过饱和,那怎么知道它析出的是单一化合物还是混合物呢?
③俩瓶相邻组分析出的晶体有没有可能是俩种不同的化合物?
④具体拿什么溶剂洗,有没有什么原则可以参考?


光靠签到,金币有限,第一次发帖,希望能得到大家的帮助
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qinnan

银虫 (正式写手)

引用回帖:
8楼: Originally posted by 大蛀蟲 at 2014-10-30 10:35:23
谢谢,那请问为什么要用抽洗呢?另外固体很难溶解啊,做核磁都直接拿DMSO溶的,可TLC不能用DMSO溶啊...

杂质也很难溶解吗? 抽洗可以很快去除杂质的。
9楼2014-10-30 10:49:12
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普通回帖

jytryh

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
大蛀蟲: 金币+15, ★★★很有帮助 2014-11-01 08:30:34
①样品1g以上我会过柱,100mg左右我就跑制备板了,那么硅胶柱最小的上样量大概是多大呢?我这边最小的柱子直径是1cm左右
②有些收集液放置一晚或者更长时间,挥发掉部分溶剂后析出晶体,听师兄说只要将其过滤,拿多种溶剂冲洗就能得到纯的化合物了,结晶是因为溶剂挥发溶液过饱和,那怎么知道它析出的是单一化合物还是混合物呢?
③俩瓶相邻组分析出的晶体有没有可能是俩种不同的化合物?
④具体拿什么溶剂洗,有没有什么原则可以参考?
柱子直径是1cm,可以分离30mg的样品,我分过20mg的,
是单一化合物还是混合物,爬个板就OK,
俩瓶相邻组分析出的晶体有可能是俩种不同的化合物,也有可能是同一化合物
具体拿什么溶剂洗要根据化合物的性质,就是用对样品溶解小对杂质溶解大的溶剂
中医药是中华民族一颗璀璨的明珠
2楼2014-10-29 14:14:32
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大蛀蟲

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by jytryh at 2014-10-29 14:14:32
①样品1g以上我会过柱,100mg左右我就跑制备板了,那么硅胶柱最小的上样量大概是多大呢?我这边最小的柱子直径是1cm左右
②有些收集液放置一晚或者更长时间,挥发掉部分溶剂后析出晶体,听师兄说只要将其过滤,拿多 ...

谢谢你~
①20mg样品过柱子也是干法装柱干法上样吗?如果是干法上样,那得用多少硅胶拌样呢?不会也用20mg吧?
②结晶出来的东西一般都难溶或者微溶,如果要点板那要用大量溶剂去溶解咯?
④某种溶剂对样品的溶解度大小我们也只能从洗的过程中去观察吧?
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3楼2014-10-30 07:12:20
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jytryh

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

1.拌样用硅胶要根据具体化合物的溶解性
2.不爬板也可以,有条件直接打谱
4.如是未知物只能从洗的过程中去观察
中医药是中华民族一颗璀璨的明珠
4楼2014-10-30 08:35:33
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大蛀蟲

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by jytryh at 2014-10-30 08:35:33
1.拌样用硅胶要根据具体化合物的溶解性
2.不爬板也可以,有条件直接打谱
4.如是未知物只能从洗的过程中去观察

谢谢
①溶解性好的话拌样硅胶可以少加些?请问你过20mg样品那次是什么情况呢?
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5楼2014-10-30 10:03:15
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qinnan

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
大蛀蟲: 金币+5, ★★★很有帮助 2014-11-01 08:31:01
2楼回答的不错,我想补充的是,洗固体我这用的是抽洗。结晶的固体先不管是不是纯的,关键是固体,应该比液体纯吧。分离每个步骤只要能使样品得到富集,这步就不白做。先拿出来在说。然后用抽洗(不知道你看懂这个概念不洗液瞬间接触样品的表面,然后被抽走),固体用TLC 、hplc 看看纯度。决定下部怎么做。
6楼2014-10-30 10:26:09
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qinnan

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by 大蛀蟲 at 2014-10-30 10:03:15
谢谢
①溶解性好的话拌样硅胶可以少加些?请问你过20mg样品那次是什么情况呢?...

20mg 里面是不是含有色素等物质,上个凝胶柱吧。去点色素。硅胶有死吸附的。
7楼2014-10-30 10:28:23
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大蛀蟲

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
6楼: Originally posted by qinnan at 2014-10-30 10:26:09
2楼回答的不错,我想补充的是,洗固体我这用的是抽洗。结晶的固体先不管是不是纯的,关键是固体,应该比液体纯吧。分离每个步骤只要能使样品得到富集,这步就不白做。先拿出来在说。然后用抽洗(不知道你看懂这个概 ...

谢谢,那请问为什么要用抽洗呢?另外固体很难溶解啊,做核磁都直接拿DMSO溶的,可TLC不能用DMSO溶啊
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8楼2014-10-30 10:35:23
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abc8256338

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
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大蛀蟲: 金币+10, ★★★很有帮助 2014-11-01 08:31:08
1.硅胶的上样量,我做少的一次是400mg左右。具体情况我一般是根据样品跑板的结果来看。点多,颜色又不同,我就过凝胶了。2.过滤,用多种溶剂洗,我用过,可以得到单体,但很耗时间。如果判断是否是单一晶体,只要点样,跑两三个系统还是一个点的话,就可以确定是单一晶体了。3.这儿应该有可能吧。做分离,他们都说一定要仔细吧。万事都有可能。哈哈  共勉。
10楼2014-10-31 10:27:19
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