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tunanzhizhi

新虫 (初入文坛)

[交流] RNA提取 已有4人参与

实验要做荧光定量PCR，现在在提RNA，结果用微量分光光度计检测A260/A280，和浓度conc.，同一个样品连续测了七八次，每次都不一样，A260/A280的值从2.223一直降到1.563，相对应的浓度在缓慢的增大，从121.65到124.20，想问下是什么原因，测量时需要测三次求平均值吗，数据一直变可以用吗，RNA的浓度可以做荧光定量PCR吗，谢谢啦
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1楼 2014-10-26 21:54:57
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12101008

铜虫 (小有名气)
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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-10-27 08:38:58
你在测的过程中RNA不断的在降解，所以A260/A280一直在降，这个比值降说明你的RNA完整性越来越低。是可以做qPCR的，只要没有DNA污染，RNA比较完整就可以。
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2楼2014-10-26 23:25:25
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cnzpli

金虫 (正式写手)
★ ★
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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-10-27 08:39:15
除非你测的时间用太久 不然绝对不会这样 怀疑仪器故障 我们的仪器昨天刚做了检修 工程师说核心部件已经老化了误差超过10% 已经无法校准了

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3楼2014-10-26 23:33:04
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盛夏海棠

木虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
做定量不知道你取几微升RNA反转录？如果取2微升的话你现在的浓度需要加16微升反转录，这个浓度太低了，并且260/280的值最好在1.8-2.0之间，建议你重新提了做
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天道酬勤
4楼2014-10-27 08:43:42
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chuanqi0711

银虫 (小有名气)
要看反转录盒子上要求的RNA浓度了，之前最好去除一下杂DNA
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5楼2014-10-28 08:49:59
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