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tunanzhizhi

新虫 (初入文坛)

[交流] RNA提取 已有4人参与

实验要做荧光定量PCR,现在在提RNA,结果用微量分光光度计检测A260/A280,和浓度conc.,同一个样品连续测了七八次,每次都不一样,A260/A280的值从2.223一直降到1.563,相对应的浓度在缓慢的增大,从121.65到124.20,想问下是什么原因,测量时需要测三次求平均值吗,数据一直变可以用吗,RNA的浓度可以做荧光定量PCR吗,谢谢啦
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12101008

铜虫 (小有名气)

★ ★
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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-10-27 08:38:58
你在测的过程中RNA不断的在降解,所以A260/A280一直在降,这个比值降说明你的RNA完整性越来越低。是可以做qPCR的,只要没有DNA污染,RNA比较完整就可以。
2楼2014-10-26 23:25:25
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cnzpli

金虫 (正式写手)

★ ★
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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-10-27 08:39:15
除非你测的时间用太久 不然绝对不会这样 怀疑仪器故障 我们的仪器昨天刚做了检修 工程师说核心部件已经老化了误差超过10% 已经无法校准了

[ 发自小木虫客户端 ]
3楼2014-10-26 23:33:04
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盛夏海棠

木虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
做定量不知道你取几微升RNA反转录?如果取2微升的话你现在的浓度需要加16微升反转录,这个浓度太低了,并且260/280的值最好在1.8-2.0之间,建议你重新提了做
天道酬勤
4楼2014-10-27 08:43:42
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chuanqi0711

银虫 (小有名气)

要看反转录盒子上要求的RNA浓度了,之前最好去除一下杂DNA
5楼2014-10-28 08:49:59
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