应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 火急求助！为何Southern杂交整条DNA带都有杂交信号。
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
111/2返回列表12下一页
查看: 904  |  回复: 10
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前主题已经存档。
【有奖交流】积极回复本帖子，参与交流，就有机会分得作者 wangweimin 的 30 个金币

wangweimin

铜虫 (小有名气)

[交流] 火急求助！为何Southern杂交整条DNA带都有杂交信号。

做RFLP，用Southern杂交找DNA酶切片段与探针的杂交差异带。
  探针用的是地高辛标记法，探针长度400多bp.化学法NBT/BCIP显色，Roche的试剂盒。

做了两次，每次都是只要尼龙膜上结合有DNA的部分，整条DNA带都有杂交信号，颜色很深，完全看不出杂交带型。膜上的每条泳道看起来都是一长条深色的粗线。
最诧异的是最近一次，连旁边的DNA marker都显出来了，我的探针里应该没有marker的互补片段阿
  有没有高人知道到底是哪里出了问题啊，我的杂交温度45度，会不会是杂交温度太低导致非特异性杂交阿，以前做出过一次，杂交温度也比较低，所以就没用太高温度。辛辛苦苦做了好久，毫无结果，而且面临毕业，欲哭无泪阿，有了解的帮我出出主意阿，先谢谢了！！~
[search]RFLP Souther 地高辛[/search]
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
1楼 2008-05-05 20:25:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wangweimin

铜虫 (小有名气)
都没人知道吗，自己顶一下
赞一下 回复此楼
2楼2008-05-06 16:07:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lauren180

木虫 (著名写手)

小木虫挖井人
★
lixiaoyi1981(金币+1,VIP+0):一个值得怀疑的地方，呵呵。
是不是点样时样品跑了。
赞一下(10人) 回复此楼
细推物理须行乐。
3楼2008-05-06 16:29:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wangweimin

铜虫 (小有名气)
应该不会的，有DNA 的部分都显色了，怀疑是不是探针加多了，而且杂交不特异
赞一下 回复此楼
4楼2008-05-07 09:27:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jie2005

银虫 (小有名气)
★
lixiaoyi1981(金币+1,VIP+0):这个可能性大些，谢谢。
没有封闭好，杂交液和blocking buffer换新的。
赞一下(10人) 回复此楼
5楼2008-05-07 19:14:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wangweimin

铜虫 (小有名气)
谢谢，不过杂交液和blocking bf ,我每次用的都是新的阿，而且膜上没有DNA的部分都非常干净，还是怀疑杂交时有问题，有几回在做一次试下
赞一下 回复此楼
6楼2008-05-07 22:44:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

juliahq

铜虫 (小有名气)
★ ★
lixiaoyi1981(金币+2,VIP+0):比较详细的分析并有解决方法。谢谢
可能是DNA电泳的问题吧，按道理讲酶切彻底，电泳的时候电压稳定（最好是20v电泳时间久些比较好），DNA分带都很均匀的，不知道你电泳结束后EB染色有没有照片看到DNA比较好的分散，DIG标记Southen的时候MARK是有带得的，再者洗膜也有问题
赞一下(10人) 回复此楼
7楼2008-05-07 22:59:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

seahow

木虫 (著名写手)
肯定 是封闭不够！！你用什么封闭的。
赞一下 回复此楼
8楼2008-05-08 07:43:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wangweimin

铜虫 (小有名气)
谢谢大家的回复也 很感谢版主的帮忙！
  我封闭用的是试剂盒里提供的试剂，用时用马来酸稀释下就可以了，封闭应该是封闭膜上没有结合DNA的位点吧，没DNA的位置都很干净的。
  我跑完胶后都用EB染色观察过了，电泳和转膜过程应该都没有问题的，DNA应该是都转移到膜上了，只是没有和探针的特异性杂交带。想下次在杂交的环节作些改进。
赞一下 回复此楼
9楼2008-05-08 09:30:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

stonehhy

木虫 (正式写手)
有没有考虑一下探针的问题，有没有可能降解了，或者里面混有小片断，可以电泳看一下探针的完整性。
赞一下 回复此楼
10楼2008-05-09 15:57:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 wangweimin 的主题更新
111/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[硕博家园] 招收生物学/细胞生物学调剂 +4 IceGuo 2026-03-26 5/250 2026-03-29 01:25 by griffith2014
[考研] 070305高分子化学与物理 304分求调剂 +7 c297914 2026-03-28 7/350 2026-03-29 01:17 by 544594351
[考研] 求化学调剂 +4 wulanna 2026-03-28 4/200 2026-03-28 13:37 by 唐沐儿
[考研] 283求调剂 +7 A child 2026-03-28 7/350 2026-03-28 12:05 by zllcz
[考研] 0856，材料与化工321分求调剂 +12 大馋小子 2026-03-27 13/650 2026-03-28 10:56 by self2008
[考研] 086000调剂 +3 7901117076 2026-03-26 3/150 2026-03-27 21:34 by Jianing_Mi
[考研] 283求调剂（080500） +4 A child 2026-03-27 4/200 2026-03-27 15:34 by XPU李庆
[考研] 308求调剂 +7 墨墨漠 2026-03-25 7/350 2026-03-27 14:47 by 狂炫麦当当
[考研] 08开头275求调剂 +4 拉谁不重要 2026-03-26 4/200 2026-03-27 14:12 by Delta2012
[考研] 求调剂 +3 刘柯@ 2026-03-24 4/200 2026-03-27 11:28 by shangxh
[考研] 0703化学338求调剂！ +6 Zuhui0306 2026-03-26 7/350 2026-03-27 10:35 by shangxh
[考研] 329求调剂 +7 钮恩雪 2026-03-25 7/350 2026-03-27 04:28 by wxiongid
[考研] 求调剂 一志愿 本科 北科大 化学 343 +6 13831862839 2026-03-24 7/350 2026-03-26 22:57 by 不吃魚的貓
[考研] 352求调剂 +4 大米饭！ 2026-03-22 4/200 2026-03-26 16:40 by 不吃魚的貓
[考研] 289求调剂 +17 硕星赴 2026-03-23 17/850 2026-03-26 16:18 by 不吃魚的貓
[考研] 【2026考研调剂】制药工程 284分 求相关专业调剂名额 +4 袁奂奂 2026-03-25 8/400 2026-03-25 14:32 by lbsjt
[考研] 各位老师您好：本人初试372分 +5 jj涌77 2026-03-25 6/300 2026-03-25 14:15 by mapenggao
[考研] 347求调剂 +4 L when 2026-03-25 4/200 2026-03-25 13:37 by cocolv
[考研] 285求调剂 +3 AZMK 2026-03-24 3/150 2026-03-25 12:23 by userper
[考研] 上海电力大学材料防护与新材料重点实验室招收调剂研究生（材料、化学、电化学，环境） +4 我爱学电池 2026-03-23 4/200 2026-03-25 00:59 by 1027_324
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭