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wangweimin

铜虫 (小有名气)

[交流] 火急求助！为何Southern杂交整条DNA带都有杂交信号。

做RFLP，用Southern杂交找DNA酶切片段与探针的杂交差异带。
  探针用的是地高辛标记法，探针长度400多bp.化学法NBT/BCIP显色，Roche的试剂盒。

做了两次，每次都是只要尼龙膜上结合有DNA的部分，整条DNA带都有杂交信号，颜色很深，完全看不出杂交带型。膜上的每条泳道看起来都是一长条深色的粗线。
最诧异的是最近一次，连旁边的DNA marker都显出来了，我的探针里应该没有marker的互补片段阿
  有没有高人知道到底是哪里出了问题啊，我的杂交温度45度，会不会是杂交温度太低导致非特异性杂交阿，以前做出过一次，杂交温度也比较低，所以就没用太高温度。辛辛苦苦做了好久，毫无结果，而且面临毕业，欲哭无泪阿，有了解的帮我出出主意阿，先谢谢了！！~
[search]RFLP Souther 地高辛[/search]
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1楼 2008-05-05 20:25:17
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wangweimin

铜虫 (小有名气)
应该不会的，有DNA 的部分都显色了，怀疑是不是探针加多了，而且杂交不特异
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4楼2008-05-07 09:27:17
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wangweimin

铜虫 (小有名气)
都没人知道吗，自己顶一下
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2楼2008-05-06 16:07:30
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lauren180

木虫 (著名写手)

小木虫挖井人
★
lixiaoyi1981(金币+1,VIP+0):一个值得怀疑的地方，呵呵。
是不是点样时样品跑了。
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细推物理须行乐。
3楼2008-05-06 16:29:47
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jie2005

银虫 (小有名气)
★
lixiaoyi1981(金币+1,VIP+0):这个可能性大些，谢谢。
没有封闭好，杂交液和blocking buffer换新的。
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5楼2008-05-07 19:14:52
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