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laisforever

银虫 (小有名气)

[求助] cDNA扩增 已有3人参与

我对同样一批样品进行提取RNA,逆转录成cDNA,然后扩增目的条带
问题是:提取了2次RNA,得到的比值差别特别大,我就想问一下,这时候我应该做什么?
我认为应该是两次提取的RNA的问题,也有人说是cDNA的问题,就想跑一下cDNA,我没有跑过cDNA,
不知道跑出来的条带图应该是什么样子的,有人吗?指导一下
还是我应该再提取一次RNA,用这3次的结果做准
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人生在世,俯仰之间,唯有追求卓越,但求尽其所能.
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梨涡浅笑096

木虫 (初入文坛)

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★ ★ ★
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kx444555: 鼓励交流 2014-10-22 12:23:52
laisforever: 金币+3, ★★★很有帮助 2014-10-23 15:36:48
cDNA没法跑电泳。会不会是RNA有点降解或者是没混匀,可以用RNA跑个电泳看看,看是不是降解了。

[ 发自小木虫客户端 ]
2楼2014-10-22 11:30:37
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happydove

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
kx444555: 鼓励交流 2014-10-22 12:23:57
laisforever: 金币+2, 有帮助 2014-10-23 15:37:00
楼主说的比值是什么,实验目的又是什么
建议看RNA,质量好,完整就没问题了。
3楼2014-10-22 11:36:33
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大笨熊敏

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-10-24 21:02:42
cDNA跑出来是弥散带的,根本看不了。你想知道cDNA反转录成功没就是找个能扩得出条带的引物试验跑PCR看能扩出条带不。或者你上个RNA的图给我们看看,一般RNA提的没问题,反转录肯定是没问题的。
4楼2014-10-22 20:52:29
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laisforever

银虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 大笨熊敏 at 2014-10-22 20:52:29
cDNA跑出来是弥散带的,根本看不了。你想知道cDNA反转录成功没就是找个能扩得出条带的引物试验跑PCR看能扩出条带不。或者你上个RNA的图给我们看看,一般RNA提的没问题,反转录肯定是没问题的。

谢谢,我已经懂了
人生在世,俯仰之间,唯有追求卓越,但求尽其所能.
5楼2014-10-23 15:37:22
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selt

新虫 (小有名气)


送红花一朵
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-10-24 21:02:52
cDNA没法跑电泳看,你可以用cDNA做模板,扩增一下看家基因或目的基因再跑电泳、
6楼2014-10-23 17:30:05
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