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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 干扰/敲除 » 自杀质粒单交换
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mtz0305

金虫 (小有名气)

[求助] 自杀质粒单交换 已有2人参与

大家好：
最近做自杀质粒，复制子时R6K的，自杀质粒分别通过电转化和接合转移的方式导入受体中，培养几天后都长出了克隆。我想请教大家的是：（1）怎么准确的判断R6K复制子不能再该菌中复制，这种不复制是非常严格的不复制还是偶尔可以得到一些克隆的不复制呢（2）若该复制子的确不复制，是不是长出的克隆中，质粒一定是通过同源臂交换到了染色体上，要是有假阳性都有什么样的情况呢。请大家热心解答一下啦。。。
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做自己最好！
1楼 2014-10-16 16:31:39
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mtz0305

金虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by bolysu at 2014-10-16 18:30:01
该复制子需要能够表达π蛋白的宿主才能够复制

你好，你做过这个质粒的实验吗，交流一下
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做自己最好！
3楼2014-11-13 21:19:00
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bolysu

禁虫 (著名写手)
感谢参与，应助指数 +1
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mtz0305
2楼2014-10-16 18:30:01
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爱总是年轻

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

目前我也处于这个过程中，也有一些疑惑，接合转移之后能够在抗性平板上生长的是可以初步确定质粒转入受体菌还是可以确定已经发生了单交换。是否有能够确定发生单交换的验证方法？
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总有人要赢，为什么那个不能是我
4楼2017-11-27 21:49:14
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爱总是年轻

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

选择不能在受体菌中复制的自杀质粒，接合转移后，只有少部分的质粒会被转入受体菌中，转入之后如何它能够成功整合到基因组上，那么抗性基因就能够成功表达，然后在抗性平板上生长出菌落，这样之后呢，可以进行验证或者不验证也可以的。然后应该在无压力的条件下继续诱导进行第二次重组。
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总有人要赢，为什么那个不能是我
5楼2017-12-13 21:08:40
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