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叮咚心泉88

新虫 (初入文坛)

[求助] 最近切GST标签,用的是prescission protease,切不下来! 已有3人参与

最近切GST标签,用的prescission protease,可是试过很多方法,都切不掉我的蛋白,如pH值,酶浓度,盐浓度,都不行,再切不下来,实验就进行不下去了。求高手指点!还有就是,每次酶切后,点电泳都会多出一条带,分子量和PP酶一样,难道是PP酶?我100ul体系,只加了0.1ul,不太可能啊!大家帮忙啊!

最近切GST标签,用的是prescission protease,切不下来!
PP酶切 .jpg
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ssssllllnnnn

至尊木虫 (知名作家)

Translator and Proofreader


【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
kx444555: 鼓励交流 2014-10-15 11:29:30
我多年前做过,未遇到你这样的问题。你能否肯定你的vector确实存在prescission protease识别顺序?是你自己做的?如果是别人的,建议测序验证以下。这可能是主要的。
2楼2014-10-14 22:27:18
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叮咚心泉88

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by ssssllllnnnn at 2014-10-14 22:27:18
我多年前做过,未遇到你这样的问题。你能否肯定你的vector确实存在prescission protease识别顺序?是你自己做的?如果是别人的,建议测序验证以下。这可能是主要的。

那多出来的带是怎么回事啊?我实在想不通,能帮我分析分析么?
3楼2014-10-15 08:41:15
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ssssllllnnnn

至尊木虫 (知名作家)

Translator and Proofreader


【答案】应助回帖

kx444555: 鼓励交流 2014-10-15 11:29:33
应该是酶吧。肯定不是切下来的,它比其他的都大。
4楼2014-10-15 08:44:41
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随风飘摇11

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
PP酶是自己纯化的吧?浓度够不够?

[ 发自小木虫客户端 ]
天道酬勤
5楼2014-10-15 13:57:30
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叮咚心泉88

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
5楼: Originally posted by 随风飘摇11 at 2014-10-15 13:57:30
PP酶是自己纯化的吧?浓度够不够?

PP酶是买的,GE的,浓度都试过,浓度肯定是够的。上面的那条带我想就是酶的带,可是酶的浓度不至于那么高吧,我是100ul体系加了0.1ul的酶,那条带太明显了。不知道是怎么回事?
6楼2014-10-15 15:05:11
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叮咚心泉88

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by ssssllllnnnn at 2014-10-14 22:27:18
我多年前做过,未遇到你这样的问题。你能否肯定你的vector确实存在prescission protease识别顺序?是你自己做的?如果是别人的,建议测序验证以下。这可能是主要的。

我测序了一下,prescission protease识别顺序完全正确。那还会是什么问题呢?
7楼2014-10-20 09:50:27
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sxjcas

禁虫 (知名作家)

本帖内容被屏蔽

8楼2015-05-28 22:42:34
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sxjcas

禁虫 (知名作家)

本帖内容被屏蔽

9楼2015-05-28 22:43:35
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随风飘摇11

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

是切下来的GST标签吧。可以再过一次柱子不就行了

[ 发自小木虫客户端 ]
天道酬勤
10楼2015-05-29 10:28:10
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