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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物化学 » 最近切GST标签，用的是prescission protease，切不下来！
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叮咚心泉88

新虫 (初入文坛)

[求助] 最近切GST标签，用的是prescission protease，切不下来！ 已有3人参与

最近切GST标签，用的prescission protease，可是试过很多方法，都切不掉我的蛋白，如pH值，酶浓度，盐浓度，都不行，再切不下来，实验就进行不下去了。求高手指点！还有就是，每次酶切后，点电泳都会多出一条带，分子量和PP酶一样，难道是PP酶？我100ul体系，只加了0.1ul，不太可能啊！大家帮忙啊！

最近切GST标签，用的是prescission protease，切不下来！
PP酶切 .jpg
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1楼 2014-10-14 19:49:21
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ssssllllnnnn

至尊木虫 (知名作家)

Translator and Proofreader

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 鼓励交流 2014-10-15 11:29:30
我多年前做过，未遇到你这样的问题。你能否肯定你的vector确实存在prescission protease识别顺序？是你自己做的？如果是别人的，建议测序验证以下。这可能是主要的。
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2楼2014-10-14 22:27:18
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叮咚心泉88

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by ssssllllnnnn at 2014-10-14 22:27:18
我多年前做过，未遇到你这样的问题。你能否肯定你的vector确实存在prescission protease识别顺序？是你自己做的？如果是别人的，建议测序验证以下。这可能是主要的。

那多出来的带是怎么回事啊？我实在想不通，能帮我分析分析么？
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3楼2014-10-15 08:41:15
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ssssllllnnnn

至尊木虫 (知名作家)

Translator and Proofreader

【答案】应助回帖

kx444555: 鼓励交流 2014-10-15 11:29:33
应该是酶吧。肯定不是切下来的，它比其他的都大。
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4楼2014-10-15 08:44:41
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随风飘摇11

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
PP酶是自己纯化的吧？浓度够不够？

[ 发自小木虫客户端 ]
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天道酬勤
5楼2014-10-15 13:57:30
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叮咚心泉88

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 随风飘摇11 at 2014-10-15 13:57:30
PP酶是自己纯化的吧？浓度够不够？

PP酶是买的，GE的，浓度都试过，浓度肯定是够的。上面的那条带我想就是酶的带，可是酶的浓度不至于那么高吧，我是100ul体系加了0.1ul的酶，那条带太明显了。不知道是怎么回事？
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6楼2014-10-15 15:05:11
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叮咚心泉88

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by ssssllllnnnn at 2014-10-14 22:27:18
我多年前做过，未遇到你这样的问题。你能否肯定你的vector确实存在prescission protease识别顺序？是你自己做的？如果是别人的，建议测序验证以下。这可能是主要的。

我测序了一下，prescission protease识别顺序完全正确。那还会是什么问题呢？
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7楼2014-10-20 09:50:27
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sxjcas

禁虫 (知名作家)
本帖内容被屏蔽
8楼2015-05-28 22:42:34
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sxjcas

禁虫 (知名作家)
本帖内容被屏蔽
9楼2015-05-28 22:43:35
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随风飘摇11

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

是切下来的GST标签吧。可以再过一次柱子不就行了

[ 发自小木虫客户端 ]
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天道酬勤
10楼2015-05-29 10:28:10
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