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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 为啥RT-PCR
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wu-ke-da

金虫 (小有名气)

学习的路上

[求助] 为啥RT-PCR 已有2人参与

做RT-PCR时，为了保证不是RNA的质量问题引起的失败，在反转录时就做了空白对照，在一组PCR管中加的是无菌水代替RNA，其余条件均不变，最后用两组实验合成的cDNA做模板，进行PCR反应，反应体系及程序完全一样，最后扩增的结果如图一。左一和左三是加了RNA的，左二和左四是加无菌水代替RNA的，右一是marker，奇怪的是我的目的条带大概就在1000，这个结果差不多正确，1500bp的marker，但为啥加了无菌水代替RNA的也能出目的条带？
    而且，楼主当时举得marker有些没有跑开，把胶又拿回去跑，最后再进行检测，就出现了图二，左二和左四降解比较明显。
    对于这种结果，我真是醉了，现在完全不知道问题出在哪里，请求各位大神支招，谢谢！

为啥RT-PCR
2014.10.13PCR结果.jpg


为啥RT-PCR-1
2014.10.13PCR延长电泳时间后的结果.jpg
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喜欢生物，所以想好好研究下去！
1楼 2014-10-13 15:10:12
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jian212

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
是不是反转录的时候对照就已经有CDNA 混进去了，要不解释不了了。、。
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学习再学习，努力再努力。
2楼2014-10-13 16:33:18
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
wu-ke-da(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-10-15 14:54:02
样品污染。而且阴性对照也不是这么搞滴。
水代替cDNA进行PCR，叫做NTC；逆转录时不含逆转录酶的样品之后进行PCR，叫做NC。
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3楼2014-10-15 09:15:58
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wu-ke-da

金虫 (小有名气)

学习的路上
引用回帖:
3楼: Originally posted by jurkat.1640 at 2014-10-15 09:15:58
样品污染。而且阴性对照也不是这么搞滴。
水代替cDNA进行PCR，叫做NTC；逆转录时不含逆转录酶的样品之后进行PCR，叫做NC。

哦，我再试一下，弱弱地问一句，NTC和NC是什么意思啊？
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喜欢生物，所以想好好研究下去！
4楼2014-10-15 14:14:09
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)
引用回帖:
4楼: Originally posted by wu-ke-da at 2014-10-15 14:14:09
哦，我再试一下，弱弱地问一句，NTC和NC是什么意思啊？...

no templete control, negative control
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5楼2014-10-15 15:49:00
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wu-ke-da

金虫 (小有名气)

学习的路上
引用回帖:
5楼: Originally posted by jurkat.1640 at 2014-10-15 15:49:00
no templete control, negative control...

哦，知道了，非常谢谢！
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喜欢生物，所以想好好研究下去！
6楼2014-10-15 16:30:42
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