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wu-ke-da

金虫 (小有名气)

学习的路上

[求助] 为啥RT-PCR已有2人参与

做RT-PCR时,为了保证不是RNA的质量问题引起的失败,在反转录时就做了空白对照,在一组PCR管中加的是无菌水代替RNA,其余条件均不变,最后用两组实验合成的cDNA做模板,进行PCR反应,反应体系及程序完全一样,最后扩增的结果如图一。左一和左三是加了RNA的,左二和左四是加无菌水代替RNA的,右一是marker,奇怪的是我的目的条带大概就在1000,这个结果差不多正确,1500bp的marker,但为啥加了无菌水代替RNA的也能出目的条带?
    而且,楼主当时举得marker有些没有跑开,把胶又拿回去跑,最后再进行检测,就出现了图二,左二和左四降解比较明显。
    对于这种结果,我真是醉了,现在完全不知道问题出在哪里,请求各位大神支招,谢谢!

为啥RT-PCR
2014.10.13PCR结果.jpg


为啥RT-PCR-1
2014.10.13PCR延长电泳时间后的结果.jpg
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喜欢生物,所以想好好研究下去!
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)

引用回帖:
4楼: Originally posted by wu-ke-da at 2014-10-15 14:14:09
哦,我再试一下,弱弱地问一句,NTC和NC是什么意思啊?...

no templete control, negative control
5楼2014-10-15 15:49:00
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jian212

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
是不是反转录的时候对照就已经有CDNA 混进去了,要不解释不了了。、。
学习再学习,努力再努力。
2楼2014-10-13 16:33:18
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
wu-ke-da(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-10-15 14:54:02
样品污染。而且阴性对照也不是这么搞滴。
水代替cDNA进行PCR,叫做NTC;逆转录时不含逆转录酶的样品之后进行PCR,叫做NC。
3楼2014-10-15 09:15:58
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wu-ke-da

金虫 (小有名气)

学习的路上

引用回帖:
3楼: Originally posted by jurkat.1640 at 2014-10-15 09:15:58
样品污染。而且阴性对照也不是这么搞滴。
水代替cDNA进行PCR,叫做NTC;逆转录时不含逆转录酶的样品之后进行PCR,叫做NC。

哦,我再试一下,弱弱地问一句,NTC和NC是什么意思啊?
喜欢生物,所以想好好研究下去!
4楼2014-10-15 14:14:09
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